Descripción del perfil metabólico de adenomas hipofisarios mediante espectroscopia "ex-vivo", por resonancia magnética de alta resolución con rotación al ángulo mágico
- Autores: Pedro Antonio Riesgo Suárez
- Directores de la Tesis: Pedro Roldán Badía (dir. tes.), José Piquer Belloch (codir. tes.), Bernardo Celda Muñoz (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2017
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Guillermo García March (presid.), F. Javier Salvador Rodríguez (secret.), Pilar López Larrubia (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Medicina por la Universitat de València (Estudi General)
- Materias:
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- Resumen
INTRODUCCION La técnica experimental de espectroscopia ex-vivo, mediante resonancia magnética de alta resolución con rotación al ángulo mágico, utilizada en el estudio de muestras intactas de tejidos biológicos, ha demostrado ser una herramienta útil para la obtención de datos relevantes acerca de su perfil metabólico. Como ejemplo, su aplicación al estudio de tumores gliales del sistema nervioso central, se ha trasladado a la clínica diaria y tiene un papel relevante en el manejo y toma de decisiones terapéuticas.
Los adenomas hipofisarios son tumores frecuentes, con características biológicas que hacen de su diagnóstico y manejo una tarea compleja que requiere un abordaje multidisciplinar y cuya caracterización histopatológica no aporta en la actualidad una información suficiente desde el punto de vista de clasificación o pronóstico.
OBJETIVOS El objetivo general del presente estudio es la descripción del perfil metabólico de adenomas hipofisarios, utilizando la técnica experimental de RMN-HR-MAS, realizada sobre muestras intactas de tejido, obtenidas quirúrgicamente. Se plantea como prueba de concepto, con relación al potencial de aplicación de la misma como apoyo al diagnóstico y clasificación de los adenomas hipofisarios.
MATERIAL Y METODOS El trabajo se realizó sobre muestras de adenomas hipofisarios que fueron intervenidos por el autor, en el Servicio de Neurocirugía del Hospital Universitario de La Ribera. Se incluyeron 58 muestras intactas de adenomas hipofisarios, con un volumen de tejido tumoral suficiente para la realización de la técnica experimental. Se estableció para cada caso el diagnóstico clínico/endocrinológico preoperatorio de tipo de adenoma, utilizando los criterios estándar aceptados internacionalmente. Además se recogieron otras variables demográficas, clínicas, radiológicas e histopatológicas.
El estudio experimental consistió en la obtención de espectros HR-MAS. Para todas las muestras se adquirieron un conjunto de espectros 1D: i) PRESAT; ii) CPMG (Carr–Purcell–Meiboom–Gill sequence) y iii) NOESY (nuclear Overhouser effect spectroscopy).
Para el grupo de 10 muestras tumorales para las que se disponía de una cantidad de tejido suficiente, también se obtuvieron espectros bidimensionales homonucleares 1H-1H TOCSY y heteronucleares 1H-13C HSQC.
El análisis estadístico chemométrico incluyó el de componentes principales (PCA) y el análisis discriminante por proyección de estructuras latentes (PLS-DA), para el conjunto de datos de los espectros de RMN.
RESULTADOS Y DISCUSION El espectro 1D PRESAT de cada una de las muestras incluyó toda su información metabólica, con un resolución y relación señal/ruido excelentes.
El análisis de los espectros bidimensionales permitió identificar un total de 40 metabolitos a partir de la asignación de 118 resonancias.
Una vez identificado el máximo número de metabolitos, se procedió al análisis estadístico de los espectros 1D PRESAT, de todas las muestras. Los datos se agruparon en el modelo de análisis de componentes principales (PCA) sin condicionamiento previo, apareciendo una buena separación espontánea entre los tres subtipos de adenomas hipofisarios estudiados para los que se contaba con un número suficiente de muestras: adenomas no funcionantes, acromegalia y enfermedad de Cushing. En el modelo PLS-DA, la discriminación fue superior a PCA, ya que se incluyó como información adicional el subtipo clínico de adenoma hipofisario, permitiendo identificar tres “regiones” en las que se agruparon preferentemente las muestras correspondientes a cada uno de los subtipos clínicos de adenomas hipofisarios estudiados para los que se contaba con una mayor número de muestras (adenomas no funcionantes, acromegalia y enfermedad de Cushing). La sensibilidad y especificidad para cada grupo en validación cruzada fue muy próxima al 90%.
Los resultados referidos muestran que, considerando únicamente los resultados del estudio del perfil metabólico de muestras de adenomas hipofisarios, analizadas mediante la técnica de RMN HR-MAS, se pudieron separar con niveles de especificidad ≥ al 90%, los tres diferentes subtipos clínicos de adenomas hipofisarios para los que se contaba con un número de muestras suficiente: adenomas no funcionantes, acromegalia y enfermedad de Cushing.
CONCLUSIONES El estudio ex-vivo mediante la técnica HR-MAS de 58 muestras de adenomas hipofisarios, permitió la descripción de su perfil metabólico no realizada previamente en la literatura, en base a la identificación de un total de 40 metabolitos a partir de la asignación de 118 resonancias. Se demostró también la existencia de una adecuada correlación entre perfiles metabólicos y diagnóstico clínico, para los tres subtipos de adenomas hipofisarios para los que se contó con un número de muestras suficiente.
Son características singulares de la técnica HR-MAS su rapidez, robustez, objetividad, reproducibilidad y fácil automatización. Por estos motivos consideramos que este trabajo aporta una base, para poder proponer su futura utilización como herramienta adicional en la caracterización diagnóstica de los adenomas hipofisarios.
