Caracterització genètica del limfoma de cèl·lules del mantell i la leucèmia limfàtica crònica mitjandel mantell i la leucèmia limfàtica crònica mitjançant microarrays i tècniques de seqüenciació: noves eines pel diagnòstic i pronòstic
- Autores: David Martín García
- Directores de la Tesis: Silvia Bea Bobet (dir. tes.), Elías Campo Güerri (tut. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2019
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Pedro Jares Gerboles (presid.), Jordi Camps Polo (secret.), Ana Mozos (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Medicina e Investigación Traslacional por la Universidad de Barcelona
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
La hibridación in situ fluorescente, o FISH, es una técnica molecular que se utiliza en rutina clínica para el diagnóstico y la estratificación de diferentes neoplasias. En los estudios de esta tesis se ha observado que en neoplasia linfoides de célula B, la técnica de FISH tiene algunas limitaciones y que se requieren mejoras para obtener un diagnóstico y una estratificación pronóstica más precisa.
En el estudio 1 proponemos una nueva plataforma de microarray para estratificar la Leucemia Linfática Crónica (CLL) sin la necesidad de usar la técnica de FISH. La CLL es una enfermedad muy común con un curso clínico muy variable. Se ha descrito que diferentes alteraciones genéticas y la complejidad genómica están relacionadas con un peor pronóstico. El objetivo del estudio 1 fue diseñar una plataforma de microarray, el qChipHemo, que analizara no solo las cuatro alteraciones recurrentes en la CLL que se analizan con la técnica de FISH, sino también otras regiones recurrentes en la CLL, la complejidad genómica y la cromotripsis. Usando qCHipHemo pudimos estratificar, en un solo experimento, los casos analizando todas las alteraciones con significado pronóstico, como son llq, 13q, 17p, la complejidad genómica o la cromotripsis. Por lo tanto, concluimos que el uso de qChipHemo permite una mejor estratificación pronóstica en la CLL comparado con la técnica de FISH y proponemos que sería una buena opción para ser utilitzada en la rutina.
clínica.
En el estudio 2 pudimos identificar la alteración oncogénica primaria en la mayoría de los casos con Linfoma de células del manto Ciclina D1-negativo (MCL), un subgrupo de MCL que no presenta la translocación oncogénica primaria t(ll; 14)(q13;q32) ni la sobreexpresión de ciclina D1. Mediante la técinca de FISH pudimos detectar que el 70% de los casos MCL Ciclina D1-negativos presentavan una translocación a CCND2 provocando su sobreexpresión. Los casos restantes sobreexpresavan CCND2, CCND3 o CCNE1 i CCNE2 concomitante sin reordenamiento aparente usando la técnica de FISH break-apart. Mediante técnicas de secuenciación de nueva generación (NGS) pudimos detectar una inserción críptica del enhancer de la inmunoglobulina IGK o IGL que explicaba la sobreexpresión de la ciclina D3 en 3 casos diferentes. A partir de la localización de la inserción obtenida por NGS, pudimos diseñar unas sondas específicas para poder detectar el reordenamiento críptico usando FISH con sondas de fusión y observamos que en un 16% de los casos presentaban una inserción críptica del enhancer de las lnmunoglobulinas cerca de CCND3 i 7% de los casos cerca de CCND2.
Por lo tanto, usando una combinación de técnicas moleculares i FISH con sondas específicas hemos podido detectar el reordenamiento primario oncogénico en el 93% de los casos MCL Ciclina D1-negativos. La detección de estos reordenamientos permiten, de esta manera, diagnosticar de una manera más precisa los casos MCL Ciclina D1-negativos.
Para concluir, creemos que el uso de FISH en la rutina clínica para el diagnóstico y el pronóstico en neoplasias linfoides de célula B tiene unas limitaciones. Sin embargo, el uso de nuevas tecnologías y la combinación de FISH con técnicas moleculares permiten que el pronóstico y el diagnóstico en la CLL y el MCL sea más preciso.
