Characterization of an Enoyl-Coa Hydratase/Isomerase Leishmania Infant um Knock-in cell line
- Autores: Luis Telles de Carvalho Coimbra Martins
- Directores de la Tesis: Pedro José Alcolea Alcolea (dir. tes.), Vicente Larraga Rodríguez de Vera (dir. tes.), Manuel Soto Álvarez (tut. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2019
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Luis Miguel Ortega Mora (presid.), José María Requena Rolanía (secret.), Inmaculada Moreno Iruela (voc.), Antonio Marcilla Díaz (voc.), Rafael Giraldo Suárez (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Las leishmaniosis son un grupo de enfermedades zoonóticas infecciosas causadas por un parásito protozoario intracelular obligado del genero Leishmania (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), transmitido por la picadura de un flebótomo hembra (Diptera: Psychodidae). El ciclo biológico de Leishmania es digenético y se encuentra definido por dos estadíos principales. Las formas clínicas principales de esta enfermedad son la leishmaniosis cutánea (CL), la mucocutánea (MCL) y la visceral (VL). Apenas se observan síntomas cutáneos y viscerales en perros. El tratamiento está actualmente basado en antimoniales pentavalentes que producen efectos secundarios severos y causan resistencias. Se han desarrollado varias vacunas frente a leishmaniosis canina, pero la mayoría causan varias reacciones adversas o no confieren protección suficiente. La enoil-CoA hidratasa/isomerasa de Leishmania infantum (LiECH), codificada por el gen LinJ.29.2420, está sobre-expresada en promastigotes metacíclicos al nivel de mRNA y, esta involucrada en la β-oxidación de ácidos grasos, que es más activa en los estadíos infectivos. LiECH es idéntica al ortólogo de L. donovani y tiene una homología del 46.82% con el ortólogo de humano. Las prediciones basadas en la estructura similar del ortólogo de Rattus norvegicus sugieren que el centro activo está compuesto por 30 residuos de aminoácidos y que el Glu120, Glu132 y el Glu133 son los residuos catalíticos. Se obtuvo un anticuerpo policlonal específico a partir de la LiECH purificada que fue utilizado para estudiar la abundancia y localización de la proteína. LiECH es más abundante en la fase logarítmica inicial de ambos promastigotes wild-type y transfectantes. También es más abundante en promastigotes PNA+ en comparación con metacíclicos PNA-, sugeriendo que los niveles de mRNA no corresponden a la abundancia de proteína. LiECH es más abundante en amastigotes intracelulares que en promastigotes, alcanzando niveles considerablemente superiores en la línea knock-in. La LiECH se encuentra posiblemente compartimentalizada en el citoplasma y su localización no cambia entre promastigotes knock-in y control. El estudio de proteómica cuantitativa sugiere que, además de que la LiECH es más abundante en promastigotes knock-in a lo largo de toda la curva de crecimiento, existen también dos proteínas, posiblemente relacionadas con la infectividad de Leishmania, que son también más abundantes en relación con el control (la proteína nodulina-like a día 1, y la ascorbato peroxidasa a día 3). El estudio de infectividad in vitro muestran que los promastigotes pIRmcs3-LiECH knock-in son significativamente más infectivos 48 y 72 h post-infección en términos de porcentaje de células infectadas y de número de amastigotes por célula infectada. Sin embargo, la inoculación de LiECH no confiere protección frente a la infección por L. infantum en el modelo de hámster.
LiECH puede ser una buena diana terapéutica pero probablemente no es un buen candidato vacunal.
