Resumen de Disseny, produccio a escherichia coli, i caracteritzacio d'antigens recombinants del virus de la febre aftosa
Este trabajo se ha centrado en el estudio de la produccion de antigenos viricos recombinantes. Los genes 3d y vp1 del virus de la fiebre aftosa se han expresado en un sistema termoinducible basado en los promotores pl y pr. Dado que vp1 es toxica para la celula se ha fusionado al extremo n-terminal de la beta-galactosidasa. Esta, al tener actividad enzimatica, se ha usado como marcador en una serie de procesos: cuantificacion de proteina recombinante, monitorizacion a traves de un fia y purificacion. Se ha observado una influencia del gen reca en la produccion de proteinas recombinantes. Se han buscado regiones permisivas dentro del enzima donde insertar un fragmento de vp1. Se ha localizado una zona entre los aminoacidos 275-279, capaz de aceptar inserciones de 27 aminoacidos sin perder actividad enzimatica, se ha caracterizado la antigenicidad de esta region (sitio a). La antigenicidad del sitio a es diferente dependiendo de la region de la insercion, y que esta es maxima en la zona 275-279. Se ha ensayado la inmunogenicidad de las construcciones mas antigenicas. Se ha producido la proteina 3d en diferentes cepas y se ha estudiado su reconocimiento por un conjunto de sueros de diversas procedencias. Finalmente se ha visto que la induccion del gen 3d en e.Coli provoca la activacion del sistema sos.
