Resumen de Procarboxipeptidases de pancrees huma: aillament i caracteritzacio dels cdnas. Expressio heterologa del domini globular del segment d'activacio de la procarboxipeptidasa a2
A partir de una genoteca de cdna de pancreas humano mediante la aplicacion de estrategias de rastreo immunologicas y de rastreo con sondas de acidos nucleicos marcados radioactivamente se han conseguido aislar los cdnas completos correspondientes a las procarboxipeptidasa pancreaticas humanas a1, a2 y b1. Estos cdnas se han clonado secuenciado completamente y se han determinado las secuencias aminoacidicas derivadas de la secuencia nucleotidica. Completando este trabajo de secuenciacion se ha realizado un modelado tridimensional de la procarboxipeptidasa a2 por aproximacion de geometria de distancias (programa diana). Finalmente a partir del cdna de la procarboxipeptidasa a2 se ha diseñado y construido el gen correspondiente al dominio globular del segmento de activacion de la procarboxipeptidasa a2. Esta construccion se ha clonado en el vector de expresion pin-iii-ompa3 y se ha obtenido y purificado la proteina recombinante. Esta proteina recombinante denominada ada2 ha sido caracterizada mediante tecnicas bioquimicas (mr, pi, coeficiente de extincion molar,...) y mediante tecnicas estructurales (resonancia magnetica nuclear rmn de proton monodimensional y bidimensional).
