Resumen de Caracterización de la familia multigénica de proteasas del tipo subtilisina de lycopersicon esculentum

Lucia Jorda Miro

• El proyecto de investigación que llevamos a cabo tiene como principal objetivo la caracterización molecular y bioquímica de proteasa p69, asi como de un grupo de proteínas relacionados con la misma. Estas proteinas forman parte de la superfamilia de las "subtisisin-like" serín proteasas, que se caracteriza por una elevada conservación de los residuos implicados en el dominio catalítico (His, Asp y Ser) en arqueobacterias, bacterias, hongos, levaduras y eucariotas superiores. Por otra parte su papel podría estar implicado en la endoproteinas precursoras que se requieren para la síntesis de peptidos o proteinas biológicamente activas, tal y como ocurre con las furinas, proteinas que encontramos en mamiferos y con las que comparten una gran homologia. Es por ello, que consideremos la caracterización de estas proteasa p69 un temas intersante de estudio.

  Para la consecución de dicho fin, realizamos las siguientes aproximaciones.

  Aislamiento de los clones genómicos correspondientes a la proteasa P69 a partir de una librería genómica de tomate EMBLÑ-3 por hibridación, usando como sonda el cDNA que codifica la proteasa P69 marcado radiactivamente.

  Como consecuencia del rastreo efectuado, obbtuvimos 16 fagos positivos.

  Tras lo analisis efectuados sobre los fagos aislados fuimos capaces de identificar varios clones solapantes que parecen representar un cluster genómico en el cual se encontrarian 6 genes, distintos del tipo subtilisina que han sido nombrados como P69A, P69B, P69C, P69C, P69D, P69E y P69F.

  Estos seis genes codifican preproteinas muy similares que tras un procesamiento protoelitico específico dan lugar a proteasas maduras que contienen los residuos Asp, His, y Ser característico de la triada catalítica de esta familia de serin-proteasas.

  Tanto experimento de RT-PCR como análisis de plantas transgénicas conteniendo los promotoroes individuales fusionados al gen rportador GUS han revelado que los seis miem