Resumen de Clonacion somatica y mejora genetica en porcino
Los esquemas de hiperprolificidad en porcino, consistentes en aplicar elevadas intensidades de selección, han resultado positivos. Actualmente, la tecnica reproductiva mas potente con el fin de aplicar intensidades extremas es la clonacon somatica.
En la presente tesis se desarrollan las diferentes etapas de la clonacion somatica tales como, maduracion oocitaria in vitro de ovarios procedentes de matadero, activacion electrica, trasplante nuclear, fusion celular, cultivo celular de los donantes de nucleos y su congelacion.
Para definir el protocolo de maduracion oocitaria in vitro se estudio el efecto de diversos factores, tales como la concentracion hormonal (0, 0.3y 10 UI/ml de PMSG y hCG), la calidad (buenos y excelentes) y el tipo de cultivo (agrupado o separado) de los complejos cumulo-oocito, sobre la maduracion nucleary tambien sobre la citoplasmatica tras la aplicación de un estimulo electrico. En base a los resultados obtenidos, las condiciones optimas fueron : 0.3 UI/ml de PMSG y hCG y el cultivo conjunto de los oocitos catalogados como excelentes y buenos. Posterioremnte, oocitos madurados in vitro se sometieron a dos tipos de tratamiento electricos habitualmente utilizados en trasplante nuclear por electrofusion. Con ello se pretedio evaluar la capacidad de dichos tratamientos para inducir la activacion electrica. Cada tratamiento consistió en aplicar una o dos veces en set de pulsos que estaba compuesto de dos pulsos que estaba compuesto de dos pulsos de 1.5 kV/c durante 60 us. El segundo set se aplico, en su caso, 30 minutos despues del primero. Finalizado el tratamiento electrico, los oocitos se incubaron en medio TCM-199+10% FCS con o sin 7.5 g/ml de Citocalasina B. De los resultados se extrae que, a pesar de que ambos tratamientos son suficientes para activar oocitos, la repeticion beneficia las tasas de division (69% vs. 30%, P>0.05). Por su parte, el tratamiento de CCB no causa efecto apreciable alguno ni sobre
