Transformacion genetica en melon(cucumis melo l.) y tomate (lycopersicon esculentum) con los genes chit 42 y bgn 16,2 para la obtencion de plantas resistentes a enfermedades fungicas
- Autores: Fernanda Vidigal Duarte Souza
- Directores de la Tesis: Vicente Moreno (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Politècnica de València ( España ) en 2001
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Concepción Jordá Gutiérrez (presid.), Gloria Palomares Hernandez (secret.), Vicente Pallás Benet (voc.), José García Jiménez (voc.), José Antonio Pintor-Toro (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Los cultivos de melon y tomate tienen una gran importancia socioeconomica en muchos paises del mundo. La perdida de cosecha producida por el ataque de diferentes clases de enfermedades es un grave problema en estas especies.
El aumento de la resistencia y tolerancia a la infeccion por hongos, bacterias y virus es uno de los objetivos de mejora mas importantes en melon y tomate.
Se sabe que tanto las chitinasas como las B-glucanasas juegan un papel importante en la defensa de las plantas contra los hongos fitopatogenos.
El objetivo de este trabajo era la introduccion de dos genes aisladoso de Trichoderma harzianum, un hongo micoparasito, que codifican para una chitinasa y una B-glucanasa, en el cv.Amarillo Oro de melon y en el cv P73 de tomate, para aumentar la resistencia y tolerancia a la infeccion por hongos. Para ello se utilizo un enfoque biotecnologico.
Primero, se realizó un ensayo preliminar para ajustar el metodo de regeneracion con el cv. Amarillo Oro de melon. El protocolo de regeneracion de tomate se habia puesto a punto en un trabajo previo. Se utilizo la cepa desarmada LBA 4404 de Agrobacterium tumefaciens como vector para llevar a cabo la transformacion genetica. Los explantes inoculados produjeron plantas transgenicas de melon y tomate en un medio selectivo con Kanamicina.
Se realizaron las correspondientes PCR para confirmar la presencia de los genes Chit42 y bgn 1,6. Tambien se llevaron analisis Southerb and Northen.
Ademas se evaluo la expresion genetica mediante analisis western.
Se determino el nivel de ploidia de las plantas transgenicas mediante dos tecnicas distintas, el conteo de cromosomas y la citometria de flujo. Se detecto la presencia de plantas poliploides tanto en melon como en tomate.
Se describio y analizo histologicamente un posible mutante insercional afectado en el desarrollo floral aparecido en uno de los experimentos de transformacion genetica.
