Identificación, clonaje y expresión heteróloga de las subunidades nicotínica "alpha"9 y "alpha10" de la célula cromafín

• Autores: Luisa Mª Solís Garrido
• Directores de la Tesis: Carmen Montiel López (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2006
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Pedro Sánchez García (presid.), Mercedes Villarroya Sánchez (secret.), M. Roset (voc.), Antonio Rodríguez Artalejo (voc.), María Pilar D'Ocon Navaza (voc.)
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • n 1991, Shirvan y colaboradores identificaron una nueva población "atípica" de receptores colinérgicos acoplados a la secreción de catecolaminas en células cromafines bovinas. Estos receptores, a los que denominaron "muscatínicos" poseían la sorprendente propiedad de presentar una farmacología a medio camino entre la correspondiente al receptor nicotínico y el muscarínico. Sin embargo, transcurridos 15 años de su identificación inicial, aún permanece sin resolver la naturaleza molecular de este receptor "atípico". Las receptores nicotínicos neuronales para la acetilcolina (nAChRs) son complejos proteicos pentaméricos construidos por la combinación de diversas subunidades de las cuales, hasta la fecha, han sido identificadas y clonadas doce (alfa2-alfa10, beta2-beta4). Curiosamente, el nAChR constituido por las subunidades alfa9 y alfa10, las dos últimas en ser identificadas y clonadas en epitelio olfatorio y cóclea de rata, posee propiedades farmacológicas que recuerdan a las descritas para el receptor muscatínico de la célula cromafín. Por todo ello, el objetivo central de esta tesis ha sido estudiar si este receptor atípico es también expresado por las células cromafines de rata y si el mismo corresponde al nAChR del subtipo alfa9alfa10. En este estudio se han combinado una serie de abordajes experimentales que incluyen técnicas moleculares, western blot, inmunocitoquímica y microscopía confocal, farmacológicas y electrofisiológicas. El análisis de nuestros datos de RT-PCR en célula única indica que el 54% y el 78% de las células cromafines examinadas expresan los mRNAS para las subunidades nicotínicas alfa3 y alfa7, respectivamente; mientras tanto, la práctica totalidad de ellas expresan los transcritos alfa9 y alfa10. Más aún, empleando técnicas inmunocitoquímicas se constata que estos últimos transcritos son traducidos a las correspondientes proteínas. Ambas subunidades a parecen combinarse para formar un receptor n