Analisis molecular de un gen especifico del sistema nervioso

• Autores: Luis de Lecea
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1991
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Pere Suau León (presid.), Emilio Salo Boix (secret.), Albert Boronat (voc.), José Miguel Carballo (voc.), Gabriel Pons Irazazábal (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • LA DIVERSIDAD CELULAR, CARACTERISTICA DEL SISTEMA NERVIOSO, ES CONSECUENCIA DE LA EXPRESION DIFERENCIAL DE MRNAS COMUNES Y ESPECIFICOS DE DETERMINADOS TIPOS CELULARES. CON EL FIN DE AISLAR Y CARACTERIZAR MRNAS EXPRESADOS EXCLUSIVAMENTE EN EL SISTEMA NERVIOSO, SE CONSTRUYO UN BANCO DE CDNA DE CEREBRO DE RATA SUBSTRAIDO FRENTE A HIGADO, RESULTANDO EN LA OBTENCION DE 100.000 CLONES PRIMARIOS. EL BANCO DE CDNA SUBSTRAIDO FUE UTILIZADO PARA EL AISLAMIENTO DE NUEVOS COMPONENTES DE LA FAMILIA DE PROTEINQUINASAS MEDIANTE EL EMPLEO DE SONDAS OLIGONUCLEOTIDICAS DEGENERADAS DERIVADAS A PARTIR DE LA SECUENCIA DE AMINOACIDOS, CARACTERISTICA DEL DOMINIO CATALITICO, CONSERVADO EN ESTOS ENZIMAS. ASI FUERON AISLADOS DOS CLONES: EL PRIMERO CORRESPONDIA A LA CALMODULINA QUINASA II - SERINA TREONINA QUINASA CONOCIDA Y ALTAMENTE ENRIQUECIDA EN SISTEMA NERVIOSO; EL SEGUNDO, DENOMINADO BSPK, FUE EL OBJETO DE ESTE TRABAJO.

    LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS REVELO LA PRESENCIA DE UNA PAUTA ABIERTA DE LECTURA DE 330 AA Y QUE CONTENIA SECUENCIAS HOMOLOGAS AL SUBDOMINIO VII CONSERVADO EN LAS QUINASAS. SE ANALIZO ASIMISMO LA DISTRIBUCION ESPACIAL POR TECNICAS DE "NORTHERN BLOT" E HIBRIDACION "IN SITU", MOSTRANDOSE SU EXPRESION EXCLUSIVAMENTE NEURONAL. LOS TRANSCRITOS RECONOCIDOS POR EL CLON - DE 5.2 Y 4 KB -, DIFERIAN EN LA UTILIZACION DE DISTINTAS SEÑALES DE POLIADENILACION Y SE HALLABAN REGULADOS A NIVEL DE SU ABUNDANCIA EN LAS DISTINTAS REGIONES CEREBRALES ANALIZADAS. SE ESTUDIO TAMBIEN LA EXPRESION A LO LARGO DEL DESARROLLO, OBSERVANDOSE UNA APARICION POST-NATAL DE LOS MRNAS. EN OTRO TIPO DE ESTUDIOS SE ANALIZO LA ESTRUCTURA DEL GEN BSPK, MEDIANTE EL CLONAJE DE UNA REGION GENOMICA DE 25 KB QUE COMPRENDIA LA TOTALIDAD DE LA SECUENCIA CODIFICANTE.

    POR OTRO LADO, EL CDNA DE RATA FUE UTILIZADO COMO SONDA PARA EL RASTREO DE UN BANCO DE CDNA DE CEREBRO DE RATON, RESULTANDO EN EL AISLAMIENTO DE UN CLON HOMOLOGO. LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS DE ESTE NUEVO CDNA REV