Resumen de Definicion y aplicaciones de un oligonucleotido complementario al 16s rrna para la determinacion de vibrio anguillarum
LA DETECCION DE V. ANGUILLARUM, PRINCIPAL AGENTE CAUSAL DE VIBRIOSIS EN ACUICULTURA, HA REQUERIDO HASTA AHORA SU AISLAMIENTO Y POSTERIOR CARACTERIZACION FENOTIPICA. EL ADVENIMIENTO DE LAS TECNICAS MOLECULARES HA PERMITIDO, ENTRE OTRAS POSIBILIDADES, LA UTILIZACION DE SECUENCIAS 16S RRNA PARA GENERAR NUEVAS FORMAS DE ABORDAR LA IDENTIFICACION, ECOLOGIA Y FILOGENIA BACTERIANA.
EN EL PRESENTE TRABAJO SE DETERMINO LA SECUENCIA PARCIAL 16S RDNA DE 39 CEPAS MAYORITARIAMENTE PERTENECIENTES AL GENERO VIBRIO, QUE FUERON ALINEADAS JUNTO CON OTRAS 20 SECUENCIAS PREVIAMENTE PUBLICADAS. SE ESTUDIARON LAS AGRUPACIONES DE SIMILITUD ENTRE TODAS ELLAS COMO UNA APROXIMACION A SUS RELACIONES FILOGENETICAS.
DE LA COMPARACION DE LAS 59 SECUENCIAS ALINEADAS SE DEFINIO UN OLIGODESOXIRRIBONUCLEOTIDO (VAV3) DE 24 BASES COMPLEMENTARIO AL 16S RRNA (POSICIONES 454 A 477 DE E.
COLI) QUE FUE USADO COMO SONDA ESPECIFICA EN LA DETECCION DE V. ANGUILLARUM.
FUERON PROBADOS DIFERENTES SISTEMAS DE DETECCION DE V.
ANGUILLARUM EN SUSPENSION: MEDIANTE HIBRIDACION DEL DNA GENOMICO TOTAL EXTRAIDO Y PURIFICADO DE LAS CELULAS CONTENIDAS EN LA MUESTRA (CON Y SIN AMPLIFICACION POR PCR), HIBRIDACION DEL RNA DE LAS CELULAS TRATADAS SOBRE MEMBRANAS O "IN SITU", E HIBRIDACION DEL RNA DE CELULAS PREVIAMENTE CULTIVADAS. LA SENSIBILIDAD DE LAS DIFERENTES TECNICAS VARIO ENTRE 4X10 AL CUBO Y 10 A LA SEXTA CELULAS.
EL USO COMBINADO DE UN MEDIO SELECTIVO RECIENTEMENTE DESCRITO (VAM), JUNTO CON LA SONDA VAV3 PERMITIO LA IDENTIFICACION DE V. ANGUILARUM CON UNA CERTEZA TOTAL.
LA METODOLOGIA FUE, POR ULTIMO, VALORADA EN MUESTRAS DE AGUA, TEJIDOS ANIMALES (DORADAS Y RODABALLOS) Y ALIMENTO VIVO (ARTEMIA Y ROTIFEROS) DE TRES AMBIENTES DIFERENCIADOS POR SU CRECIENTE COMPLEJIDAD: INFECCION EXPERIMENTAL EN UNA INSTALACION CONTROLADA, "HATCHERIES" Y LAGUNAS LITORALES DEL DELTA DEL EBRO. EN TODOS LOS CASOS PUDO DETERMINARSE LA PRESENCIA O AUSENCIA DE V.
ANGUILLARUM SIN TENER QUE RE
