Genoteques combinatorials de fragments d'anticos fv de cadena unica expressades en fags
- Autores: Francesc Blasco Urpinell
- Directores de la Tesis: Elisabet Rosell i Vives (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1997
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Antonio Celada Cotarelo (presid.), Gabriel Capellà Munar (secret.), Ricardo Pujol-Borrell (voc.), Senén Vilaró (voc.), Jaume Piulats Xancó (voc.)
- Materias:
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- Resumen
SE PREPARARON DOS GENOTECAS COMBINATORIALES DE FRAGMENTOS DE ANTICUERPO FV DE CADENA UNICA, UNA MURINA Y OTRA HUMANA, MEDIANTE LA AMPLIFICACION DE LOS GENES DE LAS REGIONES VARIABLES DE LAS INMUNOGLOBULINAS Y SU POSTERIOR ENSAMBLAJE CON UNA CADENA QUE CODIFICABA PARA QUINCE AMINOACIDOS. EL CLONAJE SE REALIZO EN UN VECTOR TIPO FAGUEMIDO QUE INCORPORABA LA PROTEINA DEL GEN III DEL FAGO FILAMENTOSO FD Y, OPCIONALMENTE, SE OBTUVIERON FRAGMENTOS COMO PROTEINAS DE FUSION UNIDAS A ESTA PROTEINAS EN CEPAS SUPRESORAS DE E. COLI QUE NO DETENIAN LA SINTESIS EN EL STOP AMBAR PREVIO A LA SECUENCIA DE LA PROTEINA DEL GEN III, O COMO FRAGMENTOS SOLUBLES EN CEPAS NO SUPRESORAS.
EL PROCESO DE INMUNIZACION IN VITRO LLEVADO A CABO PARA GENERAR LA GENOTECA MURINA ACORTO EL NUMERO DE CICLOS DE ENRIQUECIMIENTO FRENTE AL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDERMICO. LOS QUINCE FRAGMENTOS AISLADOS DE TRES CICLOS MOSTRARON UNA HOMOLOGIA NO INFERIOR AL 95% CUANDO SE DIVIDIERON EN DOS GRUPOS. LA AFINIDAD FRENTE AL RECEPTOR MEDIDA EN UN EQUIPO BIACORE ESTUVO COMPRENDIDA ENTRE 10 7 I 3 X 10 8 M1. CUANDO FUERON CONJUGADOS A RICINA A MOSTRARON SU CAPACIDAD PARA INTERNALIZARLA EN LAS LINEAS A-431 Y NP-18.
LA PREPARACION DE LA GENOTECA HUMANA, A PARTIR DE LINFOCITOS B DE BAZO, DIO COMO RESULTADO LA OBTENCION DE 2X10 7 RECOMBINANTES INDIVIDUALES.
