Estudios de expresion y transporte intracelular de una proteina de pisum sativum
- Autores: Inmaculada M. Martinez Vilchez
- Directores de la Tesis: Maria Dolors Ludevid Múgica (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1998
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Albert Bronoat Margosa (presid.), Lluïsa Vilageliu Arqués (secret.), Senén Vilaró (voc.), Pere Puigdomènech i Rosell (voc.), José Pío Beltrán Porter (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La alfa-L-fucosidasa es un enzima que hidroliza enlaces glicosídicos entre residuos de fucosa y otros monosacáridos. En guisante se ha purificado una fucosidasa de 20 kDa. Nuestros análisis de fraccionamento subcelular yde inmunocitoquímica por microscopia electrónica realizados a partir de diferentes tejidos de guisante demuestran que la fucosidasa es una proteína vacuolar. Experimentos de transcripción/traducción in vitro confirman que la fucosidasa se sintetiza como pre-proproteína con un propéptido carboxi terminal. Esta proteína se expresa de forma estable, procesándose y acumulándose correctamente en las vacuolas de células de Arabidopsis transgénicas, en protoplastos transformados transitoriamente de Arabidopsis o en las vacuolas de levadura. Mediante el análisis de la acumulación de un conjunto de fucosidasas mutadas, contruidas por delección de aminoácidos carboxi terminales o por mutagénesis dirigda en posibles señales de direccionalidad amino y carboxi terminales, se ha demostrado que el determinante de la direccionalidad vacuolar de esta proteína se encuentra dentro de sus últimos 9 aminoácidos. También se ha demostrado que la fucosidasa llega a la vacuola tras haber pasado por el Apt. de Golgi y las prevacuolas de almacenamiento. La expresión de la fucosidasa en E. coli ha permitido comprobar que este enzima sólo es activo si previamente se ha procesado su propéptido carboxi terminal.
