Caracterización molecular de genes (hupljkhypabfcd) necesarios para la síntesis de hidrogenasa en rhizobium leguminosarum bv viciae: hypb codifica para una proteina de union a niquel

• Autores: Luis Rey Navarro
• Directores de la Tesis: Tomás Ruiz Argüeso (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Politécnica de Madrid ( España ) en 1994
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Cipriano Aragoncillo Ballesteros (presid.), José Manuel Palacios Alberti (secret.), Victor Manuel Fernandez Lopez (voc.), Josep Casadesús Pursals (voc.), Nicolás Toro García (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Genética
      • Ingeniería genética
    • Microbiología
      • Metabolismo bacteriano
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• Resumen

  • Durante la fijación simbiotica de n2 en nodulos de leguminosas se genera h2 como subproducto obligado de la actividad nitrogenasa. Algunas cepas de rhizobium y bradyrhizobium poseen un sistema hidrogenasa que oxida el h2 generado en los nodulos y aumenta la eficiencia del proceso de fijacion de n2. La hidrogenasa de estas cepas es una proteina heterodimerica que contiene ni y grupos fe-s. En esta tesis se han estudiado la organizacion y funciones de los determinantes geneticos de la oxidación h2 (genes hup) en rhizobium leguminosarum. Mediante secuenciacion de un fragmento deAADN de 7,8 kb, análisis de la secuencia y caracterizacion fenotipica de mutantes con inserciones tn5, se identifico una agrupacion de ocho genes, designados hupijkhypabfcd, necesarios para la sintesis de una hidrogenasa activa. El producto del gen hupi es una rubredoxina y el de hupk probablemente una proteina de "andamiaje". Las proteínas hypabfd contienen motivos, cxxc, de unión a metales y están probablemente implicadas en la incorporación de ni a la hidrogenasa. La proteína hypb posee múltiples histidinas contiguas en el extremo n terminal y fue purificada a partir de su sobreexpresion en células de e. Coli por cromatografia de afinidad por ni. Mediante ensayos de dialisis de equilibrio se demostro que hypb se une en solucion a 4 iones ni2+ por monomero de hypb con una kd de 2,5 um. Utilizando anticuerpos contra hypb purificada se demostro la sintesis de hypb en células microaerobicas de r. Leguminosarum y en bacteroides de guisantes. Se propone que la proteina hypb une ni intracelularmente y esta implicada en su transferencia a la apoenzima durante el proceso de síntesis de la hidrogenasa.