Descripción de un método simple para enumerar e identificar virus absorbidos a membranas de nitrato de celulosa

• Autores: Georgios Papageorgiou
• Directores de la Tesis: Joan Jofre Torroella (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2001
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Gaspar Lorén Egea (presid.), Francisco Lucena (secret.), Jorge Lalucat Jo (voc.), Ferran Ribas Soler (voc.), Rosina Gironés Llop (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Virología
      • Enterovirus
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• Resumen

  • Se describe un nuevo método para la detección de virus adsorbidos a membranas de nitrato de celulosa. Se ha denominado VIRADEN a dicho método.

    Se han identificado las condiciones en que las células de la línea BGM crecen en las superficies de los filtros de membrana de nitrato de celulosa de tal manera que cubran toda la superficie del filtro y penetren al interior de los poros. Cuando se usan tales condiciones, poliovirus previamente absorbido a la membrana infectan las células y replican. Un método basado en la formación de calvas en una monocapa y un método cuantal (número más probable) han sido adaptados al método VIRADEN. Se han determinado las condiciones para la adsorción óptima de virus en el filtro de membrana.

    Las condiciones estudiadas fueron el tamaño de poro de la membrana, el acondicionamiento de la muestra, el flujo y el volumen se suspensión vírica que se puede pasar a través de la membrana. La membrana de 3um de poro dio los resultados óptimos. En cuanto al acondicionamiento de la muestra, la acidificación a pH 3.5 y la adicción de 0.05 M MgCl2 dieron resultados semejantes. El flujo óptimo fue de 200 ml por minuto y el volumen máximo de la muestra a filtrar por la membrana dependió de la naturaleza de la muestra, oscilando desde 10 ml para el agua residual bruta hasta 500 ml para agua de mar y agua de red. Una vez fijadas las condiciones se aplicó el método a diferentes tipos de muestra de agua y se observó que el método es muy eficiente en la recuperación de virus suspendidos en agua o diferentes muestras acuosas. En condiciones óptimas el método recupera aproximadamente el 150% de los virus detectados por el método estándar de ensayo de calvas en monocapa. Asimismo se probó que es posible realizar hibridación de las calvas sobre la membrana, lo que permite la fácil identificación de los virus que las han formado. Posteriormente se fijaron las condiciones para la descontaminación y des