Resumen de Interacciones del plasminógeno con la alfa-enolasa, la proteína inflamatoria de macrófagos (mip)-2alfa y la estromalisina-1
En esta tesis hemos caracterizado la interacción del plasminógeno con la alfa-enolasa, la proteína inflamatoria de macrófagos (MIP)-2alfa y la (pro)estromalisina-1((pro)MMP-3).
La alfa-enolasa es una enzima glicolítico citoplasmático ubículo, que funciona como un receptor del plasminógeno en la superficie celular. Hemos generado el mAB 9C12 contra la alfa-enolasa. Este mAB reaccionó en ELISA con la alfa-enolasa humana, incluso tras eliminar su lisina C-terminal, que media su unión al plasminógeno. El mAB 9C12 destectó alfa-enolasa en la membrana citoplasmática de neutrófilos y células monocitoides U937.
El mAB 9C12 no bloquó la unión del plasminógeno a las células. Por phage display hemos identificado la secuencias DLDFKSPDDPSRYISP, que abarca los residuos 257-272 de la alfa-enolasa humana y que se localiza en la superficie de la molécula, como el epítopo reconocido por el mAB 9C12.
Por phage display hemos identificado la quimoquina (MIP)-2alfa como una proteína que se une específicamente al plasminógeno. Esta interacción está mediada por los kringles 1-3 del plasminógeno y por la región C-terminal rica en lisinas del MIP-2alfa. La activación catalizada por tcu-PA del plasminógeno unido al MIP-2alfa asociado a una superficie es unas 2,5 veces más eficaz que en solución.
La asociación del MIP-2alfa con una superficie sólida expone su región de unión al plasminógeno, pudiendo dar lugar a un aumento en la generación local de plasmina.
La (pro)MMP-3 se une específicamente al t-PA sin hidrolizarlo. La activación de Glu-plasminógeno por t-PA en presencia de proMMP-3 sigue una cinética de Michaelis-Menten; a una concentración saturante de proMMP-3, la eficacia catalítica del tct-PA aumenta 20 veces, debido principalmente a una mayor afinidad del t-PA por el plasminógeno. El plasminógeno y el t-PA se unen a diferentes sitios de la pro-MMP-3. Estos datos son compatibles con la formación de un
