Resumen de Influència d¿alguns anestèsics i analgèsics en l¿activitat del citocrom p450 hepàtic de rata
Els estudis que s¿han de fer per conèixer el metabolisme d¿un nou producte en desenvolupament, constitueixen una part molt rellevant del coneixement preclínic i clínic d¿un potencial nou fàrmac. Un dels problemes que es planteja en el disseny de molts dels estudis preclínics era la manca d¿informació disponible sobre el tipus d¿anestèsia i/o analgèsia que es pot emprar en els animals d¿experimentació, sense que el comportament cinètic d¿aquests agents interfereixi en el procediment quirúrgic per l¿obtenció de teixits i òrgans i pels estudis de metabolisme in vivo del potencial nou fàrmac.
L¿objectiu global del present treball va ser la determinació de les interaccions potencials que determinats anestèsics i analgèsics, emprats habitualment en protocols experimentals (Ketoprofè, Ketamina, Buprenorfina, Fentanil i Xilacina), podien causar per inhibició dels principals CYP450 hepàtics, encarregats del metabolisme de fàrmacs en rates Sprague-Dawley. Es van estudiar les següents isoformes: CYP1A1/2, CYP2A1/2, CYP2B1/2, CYP2C, CYP2C11, CYP2D1, CYP2E1 i CYP3A1/2 per mitjançant experiments in vitro en un sistema d¿incubacions en microsomes de fetge de rata.
Adequació de la metodologia als objectius proposats Per assolir l¿objectiu proposat s¿havia d¿obtenir el sistema experimental, que van ser els microsomes de fetge de rata, que permetessin dur a terme tot el treball. Aquests microsomes es van caracteritzar convenientment respecte al contingut de proteïna microsomal, la determinació del CYP450, i la determinació de la NADPH-reductasa. Per cada una de les diferents isoformes de CYP450 en estudi, es va seleccionar el substrat específic que donés lloc a la formació d¿un metabòlit (reacció enzimàtica mediada específicament per la isoforma en estudi), que permetés estudiar adequadament les diferents cinètiques enzimàtiques. I per la quantificació de cada metabòlit es va posar a punt les metòdiques analítiques per HPLC amb detecció UV o fluorescència. Es van determinar els paràmetres cinètics Km i Vmax de totes les isoformes objecte d¿estudi i es va dissenyar els estudis d¿inhibició, per obtenir els valors dels paràmetres IC50 i Ki per cada isoforma. També es va determinar el factor d¿unió no específica dels fàrmacs als microsomes (fu,mic) per corretgir el valor de la Ki i obtenir el valor de Ki no unida. La Ki no unida és un valor més ¿real¿ per comparar amb les concentracions plasmàtiques de cada fàrmac. El valor de fu,mic es va determinar in vitro i in silico.
Una part important del treball va consistir en el tractament de les dades obtingudes ja que es van desenvolupar models d¿inhibició deduïts de l¿equació de Michaelis-Menten i de l¿equació de Hill. Aquestes equacions es van incorporar a les biblioteques del programa farmacocinètica WinNonlin pel càlcul de Ki amb regressions no lineals simultànies i determinar el tipus d¿inhibició (en el cas que es detectés algun tipus d¿interacció del fàrmac amb un isoforma CYP450 específica).
Es van utilitzar softwares com el WinNonlin (per determinar Ki), el Sigmaplot (per determinar l¿IC50) ; eines d¿internet com la pàgina web que conté el mètode ¿IC50-to-Ki Converter¿ (per estimar la Ki); i també diferents models (equacions) obtinguts de recerca bibliogràfica d¿articles actuals per obtenir els valors de fu,mic in silico (Hallifax, Austin, Symcyp entre d¿altres).
Valoració dels resultats obtinguts (els treballs publicats amb FI...) Els resultats més rellevants obtinguts indiquen que la ketamina pot inhibir els CYP2B1/2 amb un tipus d¿inhibició competitiva, el CYP2C11 (competitiva) i CYP2D1 (mixta). El ketoprofé pot inhibir elsl CYP3A1/2 amb un tipus d¿inhibició mixta, el CYP2B1/2 (no competitiva) i el CYP2C11 (acompetitiva). La buprenorfina pot inhibir el CYP3A1/2 amb inhibició competitiva, i la xilacina, els CYP2C (competitiva), 2C11 (competitiva), 2D1 (competitiva) i 3A1/2 (mixta).
Es conclou que l¿analgèsic fentanil és l¿únic que no presentaría potencials inhibicions de les activitats de les vuit isoformes CYPP450 estudiades, i per tant, seria un analgèsic d¿elecció pels estudis de metabolisme en rata Sprague Dawley.
