Determinación de aminoácidos y aminas biógenas mediante biosensores enzimáticos y técnicas de separación cromatográficas y electroforéticas

• Autores: Natividad Garcia Villar
• Directores de la Tesis: Santiago Hernández Cassou (dir. tes.), Javier Saurina Purroy (codir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2006
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Roser Rubio Rovira (presid.), Mercè Granados Juan (secret.), José Luís Costa Lima (voc.), Isidre Casals Ribes (voc.), Ralf Hoffman (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Química analítica
      • Análisis cromatográfico
      • Análisis electroquímico
    • Bioquímica
      • Aminoácidos
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• Resumen

  • El objetivo global de la presente tesis doctoral es el desarrollo de metodología analítica que permita la determinación sensible de aminoácidos y aminas biógenas. Para ello se ha investigado la utilización de biosensores enzimáticos, metodologías en flujo continuo y diferentes técnicas de separación como la cromatografía de líquidos (HPLC) y la electroforesis capilar (CE), en las que se ha empleado la detección potenciométrica, espectrofotométrica y la espectrometría de masas (MS). Asimismo, se han aplicado diversos métodos quimiométricos para el diseño de los experimentos y el tratamiento de los datos.

    En primer lugar, se desarrollan tres métodos potenciométricos utilizando un biosensor enzimático de lisina. Dicho biosensor está basado en un electrodo potenciométrico de contacto metálico (All-solid-state) selectivo (ISE) de ion amonio y consta de una membrana sobre la que se inmoviliza químicamente la enzima lisina oxidasa. La lisina es degradada en el biosensor, liberando amonio que es detectado por el ISE de amonio.

    Se establece un método potenciométrico para la determinación de lisina basado en el análisis conjunto de los datos multivariantes generados por un sistema de sensores en serie, compuesto por el biosensor de lisina y siete ISEs de NH4+, K+, Na+, Li+, Ca2+, Mg2+ e H+. Seguidamente, se optimiza un método de HPLC para la determinación de lisina utilizando el biosensor potenciométrico desarrollado como sistema de detección. Por último, se desarrolla un método de análisis por inyección en flujo basado en un sistema potenciométrico diferencial ene l que el biosensor de lisina es empleado como electrodo de trabajo, mientras que como electrodo de referencia se utiliza un electrodo de amonio circular. Los métodos desarrollados se aplican a la determinación de lisina en muestras de pienso de alimentación aminal y en productos farmacéuticos.

    A continuación, se desarrollan tres métodos analíticos para la determinac