Estudio de la interacción de la hiv-1 proteasa con inhibidores de dimerización. Aplicación de rmn
- Autores: Silvia Frutos Dominguez
- Directores de la Tesis: Ernest Giralt Lledó (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2006
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Francisco Sánchez i Ferrando (presid.), Ernesto Nicolás Galindo (secret.), Miquel Pons Vallès (voc.), Ana Diez Pascual (voc.), Maria Dolors Ludevid Múgica (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La HIV-1 proteasa (HIV-1 PR) es una proteína esencial para la maduración e infección del virus HIV, demostrándose que la inhibición in vitro de ésta produce partículas inmaduras y no infecciosas. Un gran número de compuestos han sido desarrollados y alguno de ellos ha sido aprobado por la FDA para el tratamiento del SIDA. Todos los compuestos aprobados por la FDA actúan inhibiendo el centro activo de la enzima. Sin embargo la resistencia y los efectos secundarios que estos fármacos presentan han provocado el desarrollo de nuevas estrategias para inhibir la HIV-1PR como es la utilización de inhibidores de dimerización.
La idea de utilizar inhibidores de dimerización está basado en el hecho que la HIV-1 PR sólo es activa en forma de dímero de manera que se han diseñado péptidos para que interaccionen con la lamina-beta antiparalela formada por los extremos N- y C-terminal de manera que se puede inhibir la enzima mediante prevención o disrupción de la formación del dímero. Debido a que no se encontraban estudios estructurales sobre los inhibidores de dimerización, en la presente tesis se propuso estudiar la interacción entre este tipo de inhibidor y la HIV-1 PR, combinando diversos marcajes isotópicos selectivos de la proteína y los correspondientes experimentos de RMN.
En primer lugar se desarrolló una metodología para obtener la HIV-1 PR con levados rendimientos mediante expresión de proteínas utilizando técnicas de genética molecular. Esto permitió establecer las exigencias que la expresión de esta proteína requiere. Ya que uno de los objetivos era el estudio estructural de inhibidores de dimerización con la HIV-1 PR, fue necesario la preparación de alguno de estos compuestos, los cuales presentaban naturaleza peptídica, por lo que se prepararon utilizando síntesis de péptidos en fase sólida. Una vez analizados mediante un ensayo de fluorescencia se procedió al estudio estructural.
