Estudio molecular de las proteinas hn y m del virus de la enfermedad de newcastle

• Autores: Ana Sagrera Aparisi
• Directores de la Tesis: Enrique Villar Ledesma (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Salamanca ( España ) en 1999
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Pedro Calvo Fernández (presid.), Marcial Llanillo Ortega (secret.), Francisco Gavilanes Franco (voc.), Miguel Ángel Chinchetru Manero (voc.), Fernando Leal Sánchez (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Proteínas
  • Ciencias de la vida
    • Virología
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• Resumen

  • El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es un virus patógeno aviar perteneciente al grupo de los paramixovirus. Posee una envoltura membranosa que rodea a una nucleocápsida helicoidal. La nucleocápsida está formada por una molécula de RNA de polaridad negativa y tres tipos de proteínas: la NP, P y L. La envoltura membranosa consiste en una bicapa lipídica, que deriva de la membrana plasmática de la célula infectada, y tres tipos de proteínas: la proteína F (de fusión) que es una glicoproteína transmembranal, formada por dos subunidades; la proteína HN(Hemaglutinina-Neuraminidasa) que es también una glicoproteína transmembranal, orientada con el dominio carboxiterminal hacia el exterior de la membrana; y la proteína M(de matriz), que no está glicosilada y se dispone en la cara interna de la membrana, formando una especie de armazón. En el trabajo se ha utilizado NDV de la cepa Clone-30, y en concreto, las proteínas HN y M han sido el objeto de estudio.

    En los que se refiere a la proteína HN, se ha investigado como afecta la desnaturalización térmica a la estructura y función de la misma, empleando para ello diversas técnicas, como son: el estudio de la pérdida de actividad enzimática, la influencia en el "binding" del virus a membranas, microcalorimetría diferencial de barrido, y cambios en la fluorescencia intrínseca del triptófano.

    Para los estudios se ha utilizado proteína HN en diferentes formas: en el NDV intacto, en envolturas solublizadas, en envolturas reconstituidas y la fracción globular soluble, correspondiente al dominio carboxiterminal externo de la proteína (CT-HN). Por este motivo, como paso previo, se ha desarrollado un sistema de obtención y purificación de la CT-HN, eliminando así los problemas que plantea el estudio de proteínas de tipo transmembtanal, que en ausencia de detergente tienden a agregar. Se ha llevado a cabo también la caracterización cinética de la activi