Resumen de Elongación de la transcripción en S. cerevisiae: el complejo THO y factores relacionados funcionalmente
La transcripción es el proceso por el cual se copia la información contenida en el DNA, a una molécula de RNA. Se divide en las etapas de iniciación, en la cual la polimerasa de RNA (RNAP) se une al DNA, abre la doble hélice y comienza la síntesis del RNA; la elongación, en la cual la RNAP completa la sínteseis del RNA, y terminación, cuando finaliza la síntesis del RNA y la RNAP se separa del Dna. En las tres etapas la RNAP requiere otros factores para su actuación. En esta tesis se estudia el papel del complejo THO en elongación de la transcripción. En primer lugar, se define al complejo THO como una unidad funcional. A continuación se determina que es capaz de unirse a DNA y RNA in vitro. Mediante ensayos de transcripción in vitro se analiza el papel en elongación de la transcripción llegándose a la conclusión de que el complejo THO es necesario para que la elongación de la transcripción sea eficiente. El análisis transcripcional se extiende al complejo Spt4-Spt5 demostrándose por primera vez que tiene un papel positivo en elongación de la transcripción y al complejo Paf1 donde mediante transcripción in vitro se demuestra su implicación en elongación de la transcripción in vitro se demuestra su implicación en elongación de la transcripción. Por último se describe cómo mutaciones en componentes del poro nuclear afectan la expresión de ciertos genes in vivo. Para comprender el papel de Hpr1 y Tho2 en transcripción, hemos diseñado varios abordajes. Por un lado, la caracterización de las proteínas que interaccionan con ellas. Así mismo, queremos comprobar si mutaciones en genes implicados en la elongación de la transcripción originan defectos en transcripción y recombinación similares a los descritos para hpr1 y tho2. Por otro lado, queremos analizar in vitro el efecto en elongación de la transcripción de hpr1 y tho2. Para ello hemos desarrollado un sistema que permite estudiar la elongación de la transcripción en extractos celulares carentes de estas proteínas. Por último, nos proponemos realizar una búsqueda de mutantes afectados en la expresión de lacZ, y comprobar si aumentan la recombinación entre repeticiones directas, con el ánimo de descubrir qué tipo de proteínas originan un defecto en transcripción asociado a la recombinación como el descrito para el Hpr1 y Tho2.
