Resumen de Identificación y caracterización molecular de nuevos loci de susceptibilidad para la enfermedad de Hirschsprung y el cáncer medular de tiroides
A. HIPOTESIS DE TRABAJO: Diversos estudios funcionales han puesto de manifiesto que el proto-oncogén RET se asocia, por mecanismos contrarios, tanto a la aparición de enfermedad de Hirschsprung (HSCR) como de cáncer medular de tiroides (MfC). Así, hoy día se sabe que mutaciones germinales de RET que conducen a una ganancia de función del receptor originan formas familiares de MfC (síndromes MEN 2), mientras que otras mutaciones que producen una pérdida de función son causantes de HSCR. Nuestro grupo tiene evidencias muy significativas de la asociación de la variante A45A, localizada en el exón 2 de RET, con el fenotipo HSCR. Todos los resultados publicados previamente por nuestro grupo sugieren la existencia de un locus ancestral asociado a los haplotipos que contienen A45A, ubicado en 5' respecto a esta variante y en un intervalo de 0-20Kb (región que se corresponde con el intrón 1de RET). El principal objetivo del presente proyecto de tesis es la identificación y caracterización molecular de ese locus de susceptibilidad para HSCR. En concreto, dicho locus podría estar asociado a un dominio implicado en la regulación de la expresión de RET. La consecución de estos objetivos contribuiría así al esclarecimiento de la base genética de esta enfermedad. Asimismo, dada la naturaleza poligénica de HSCR, hemos pretendido desarrollar una evaluación sistemática de otros genes candidatos, con el fin de identificar factores de susceptibilidad asociados a su aparición. Por otra parte, el conocimiento sobre la etiología del cáncer medular de tiroides esporádico es bastante escaso. No obstante, puesto que mutaciones activadoras de RET son responsables de las formas familiares de MfC, y que la mutación somática M918T se ha encontrado en lma proporción importante de tumores esporádicos, este gen pasa a ser el principal candidato como gen de susceptibilidad para las formas MfC esporádicas. Esta hipótesis es apoyada por el hecho de que en el punto de partida del presente trabajo, el único factor de susceptibilidad descrito para MTC esporádico en una serie de casos alemana era el polimorfismo S836S, localizado en el exón 14 de RET. Por consiguiente, nos planteamos la posibilidad de que cambios de secuencia de los genes que participan en la cascada metabólica de RET, tales como el propio receptor, sus ligandos o coreceptores, puedan jugar un papel en la patogénesis de MTC. Partiendo de esta idea, hemos iniciado una búsqueda de factores de susceptibilidad genéticos para esta patología en esos genes candidatos. B OBJETIVOS PLANTEADOS l. Identificación y caracterización molecular de un nuevo locus HSCR, ligado a los haplotipos que contienen el polimorfismo A45A del gen RET. 2. Análisis de mutaciones y polimorfismos en otros genes candidatos para HSCR. Evaluación de su implicación en la aparición de la enfermedad. 3. Búsqueda de factores de susceptibilidad genéticos para el MfC esporádico en genes candidatos para dicha patología. C CONCLUSIONES l. Se ha caracterizado una nueva mutación en el proto-oncogén RET, c.2304G menor T (E768D), en una paciente con cáncer medular de tiroides. La ausencia de otros rasgos clínicos o historia familiar de MEN 2A parece indicar que esta mutación se asocia con el fenotipo FMTC. 2. El fenómeno de asociación de las variantes -193C menor Gy 537Tmenor C del gen GFRAl a las formas esporádicas de MfC en la población alemana no es reproducible en la población española. Ninguna de las variantes de los genes GFRAl-3 parecen ser factores de susceptibilidad para el desarrollo de la enfermedad en nuestra población. 3. Tanto el análisis mutacional como la evaluación de los polimorfismos en los genes GFRAl, GFRA2, GFRA3 y GFRA4 como factores de susceptibilidad para HSCR, descartan estos genes como responsables en la patogénesis de la enfermedad. 4. Se han identificado dos variantes de secuencia en el proto-oncogén RET sobre-representadas en nuestra serie MfC, S836S e IVSl-126G menor T. Estos hallazgos sugieren la existencia de un locus de susceptibilidad de baja penetrancia para MTC, ligado a ambas variantes, que podría localizarse en dirección 5'. 5. Hemos identificado un alelo específico del proto-oncogén RET, asociado a las formas esporádicas de la enfermedad de Hirschsprung. Los estudios funcionales in vitro parecen indicar que dicho alelo provoca una disminución del nivel de nivel expresión del gen RET. Estos resultados sostienen que este alelo, probablemente en conjunción con otros factores de susceptibilidad, es causante de la aparición de HSCR esporádico. 6. La mutación C620S del proto-oncogén RET es la causante del cuadro MEN 2A, pero no de la enfermedad de HSCR en una familia en la que cosegregan ambos fenotipos, descartándose por tanto el efecto dual propuesto por otros autores para dicha mutación.
