Análisis citómico de las células madre hematopoyéticas

• Autores: Marta Garcia Escarp
• Directores de la Tesis: Jordi Petriz Gonzalez (dir. tes.), Jordi Barquinero (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2008
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Carlos Segovia Sanz (presid.), Joan Carles Domingo i Pedrol (secret.), Pedro Jose Marin Fernandez (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
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• Resumen

  • Célula stem se usa para describir una célula con capacitad de diferenciación a múltiples tipos celulares y de mantener su capacidad de autorenovación. Dicha tesis se basa en el estudio de la célula stem multipotente, derivada de tejido adulto, concretamente la célula stem hematopoyética (CMH) que reconstituye todas las células sanguíneas. Los protocolos de enriquecimiento de células stem se basan en el uso de un separador celular o sistemas de selección inmunomagnético y se realizan selecciones positivas basadas en la expresión de proteínas de membrana o la exclusión por depleción de células maduras. El protocolo clínico más extendido es la realización de una selección positiva empleando un anticuerpo que reconoce la proteína de membrana CD34, marcador específico de célula inmadura. Un método alternativo para identificar CMH, se basa en el flujo del colorante Hoechst 33342. Empleando un citómetro de flujo con láser ultravioleta, permite identificar la población celular Side Population (SP). Esta población celular es identificada en los canales de emisión del rojo lejano (>675 nm) y del azul (450 nm) con baja intensidad de fluorescencia. Estas células SP expresan una proteína de membrana, miembro de la familia de los transportadores ABC, que confiere resistencia a fármacos, la ABCG2. El transportador también es expresado en endotelio de placenta, epitelio de intestino delgado e hígado, y en células transformadas como cáncer de estómago, leucemia mieloide aguda, líneas celulares, etc.

    Esta tesis consta de dos partes diferenciadas. Una primera parte dónde se estudia la funcionalidad del transportador ABCG2 y sus mutantes, tanto en modelos celulares como en sangre periférica, médula ósea y sangre de cordón umbilical para conseguir una detección de células SP por citometría y una profundización y mayor comprensión de este nuevo fenotipo celular. También se estudia el transportador ABCB1, molécula que se expresa en las células progenitoras CD34+, para comparar las dos poblaciones celulares mediante una metodología citométrica. El método es el denominado ensayo de captación y extrusión. Distintas moléculas fluorescentes son introducidas por difusión dentro de la célula y la extrusión de estas por parte de diferentes transportadores de membrana, se analizan mediante citometría de flujo. Éste método permite conocer nuevos sustratos e inhibidores del transportador.

    Una segunda parte de la tesis, se profundiza en el conocimiento de las CMH mediante el estudio morfológico de sus telómeros, concretamente el análisis de la longitud telomérica empleando la técnica de Flow-FISH.

    Tanto las características funcionales como morfológicas de las CMH nos permiten una profundización en el conocimiento de las células stem para una mayor comprensión de su variabilidad y heterogeneidad y para una mejora en futuros protocolos de enriquecimiento y aislamiento celular