Determinación de la contaminación microbiológica del agua de riego aplicando nuevas estrategias de análisis

• Autores: Yexenia Irina Cárdenas Youngs
• Directores de la Tesis: R. Araujo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2018
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Francisco Lucena Gutiérrez (presid.), Jaume Puigagut Juárez (secret.), Jordi Dellunde Fulladosa (voc.)
• Programa de doctorado: Programa Oficial de Doctorado en Biotecnología
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
      • Bacteriología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: TDX
• Resumen

  • Resumen Esta tesis doctoral tuvo como objetivo principal identificar y cuantificar la presencia de bacterias patógenas, mediante el uso de indicadores de contaminación fecal y Legionella en aguas de riego aplicando métodos moleculares. Para su desarrollo se abordaron los siguientes temas: 1. Puesta a punto de los métodos moleculares para la determinación de las bacterias presentes en el agua mediante qPCR. Para ello, se pusieron en marcha la qPCR de E. coli y de E. faecalis, se actualizaron la qPCR de Legionella spp. y la de Legionella pneumophila, y se utilizó la qPCR para bacterias totales. Para validar las qPCR de E. coli y de E. faecalis se compararon las cuantificaciones realizadas mediante cultivo en placa, citometría de flujo y qPCR. Se logró que todas las qPCRs tuviesen curvas estándares con aspectos como la pendiente de la curva, el intercepto con el eje Y, el coeficiente de determinación y el % de eficiencia dentro de los límites acordados como aceptables. 2. Implementación de métodos de concentración para bacterias: se utilizó la concentración por floculación orgánica con leche desnatada (SMF) para concentrar diferentes microorganismos, comparando dos métodos de extracción y de cuantificación. Se estudio la recuperación de células viables cultivables y de los genomas después del proceso de concentración SMF. También se comparó la concentración de diferentes microorganismos por SMF con la concentración mediante la columna monolítica de adsorción MAF. En estos estudios encontramos que el SMF es un método que reduce drásticamente la viabilidad de las células para ser cultivadas, reduciendo a menos del 1 % la recuperación de viables cultivables. Una vez concentradas las muestras de aguas por SMF, el método de extracción de ADN que mayor recuperación de genomas permite es el kit de extracción de ADN de Qiagen, y que SMF mostró valores de genomas recuperados levemente mayores que los recuperados por MAF. 3. Se monitoreo la calidad del agua de riego procedente de dos tipos de fuentes: las convencionales, y las no convencionales. Se pudo apreciar la calidad del agua de riego procedentes de acuíferos naturales y la de diferentes estaciones de muestreo dentro de una EDAR y ERA.