Péptidos sintéticos del gb virus c. Aplicación en el diagnóstico de infección y en el diseño de potenciales agentes terapéuticos contra el vih-1
- Autores: Leticia Fernández Arauzo
- Directores de la Tesis: Isabel Haro Villar (dir. tes.), María José Gómara Elena (codir. tes.), Ernesto Nicolás Galindo (tut. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2012
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: María Rosa Infante Martínez Pardo (presid.), Francesc Rabanal Anglada (secret.), Guadalupe Ercilla González (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TDX
- Resumen
Numerosos trabajos asocian la coinfección del GBV-C y el VIH con una menor progresión de la enfermedad y con una mayor supervivencia de los pacientes una vez que el SIDA se ha desarrollado. Sin embargo, el mecanismo de acción aún no se ha determinado. De esta manera, el estudio de la interacción entre los virus GBV-C y VIH podría dar lugar a nuevos agentes terapéuticos para el tratamiento del SIDA.
Debido a que actualmente no existe ningún sistema comercial para detectar marcadores específicos de la infección por GBV-C, se ha llevado a cabo la síntesis de moléculas peptídicas ramificadas conjugando regiones de la proteína de envoltura E2 y de la proteína estructural NS4 del virus GBV-C, para posteriormente estudiar su capacidad antigénica. Por otro lado, se ha estudiado la capacidad de las moléculas sintetizadas de inhibir la fusión celular mediada por la proteína de envoltura del VIH-1 con el fin de seleccionar potenciales inhibidores de la entrada del virus a la célula.
En primer lugar, se ha realizado un estudio detallado de la proteína E2 del GVB-C mediante la preparación de microarrays peptídicos con 124 secuencias lineales de dicha proteína, empleando sueros procedentes de pacientes infectados por el VIH-1 y de personas voluntarias sanas. De esta manera, se han identificado dominios potencialmente antigénicos de la proteína E2 del GBV-C.
Tras la realización de estos ensayos y del estudio del perfil de accesibilidad del dominio potencialmente antigénico E2(7-26), se ha llevado a cabo la síntesis en fase sólida, siguiendo una estrategia Fmoc/tBu, de péptidos lineales, cíclicos y ramificados. Las construcciones peptídicas se han caracterizado mediante HPLC, UPLC y espectrometría de masas (ESI y MALDI-TOF) y se han purificado por HPLC semipreparativo.
Posteriormente, se han realizado ensayos de fusión celular con el fin de evaluar la actividad anti-VIH-1 de las moléculas peptídicas que derivan del dominio N-terminal de la proteína E2 del GBV-C. De este estudio pudo concluirse que las construcciones de tipo cíclico tienen mayor tendencia hacia una mayor inhibición de la entrada del VIH-1 en la célula.
Se ha estudiado la capacidad para detectar anticuerpos anti-GBV-C de todas las secuencias y construcciones sintéticas mediante el ensayo inmunoenzimático de ELISA con sueros procedentes de pacientes con hepatitis C crónica, de pacientes sometidos a hemodiálisis, infectados con VIH-1 y sueros de donantes voluntarios sanos. Los resultados obtenidos demostraron la potencial utilidad diagnóstica de la región E2(7-26) del GBV-C.
Por último, con un panel de sueros de pacientes infectados por el VIH-1, se ha evaluado el valor diagnóstico de los dominios peptídicos identificados mediante microarrays. La combinación de las secuencias peptídicas ensayadas ha permitido establecer una reactividad del 47% en cuanto a la detección de anticuerpos anti-E2 del GBV-C en personas infectadas por el VIH-1. Además, esta tecnología ha miniaturizado el ensayo inmunoenzimático de ELISA y ha demostrado la utilidad de los péptidos sintéticos como potenciales antígenos para el desarrollo de un sistema de diagnóstico de la infección del GBV-C.
