Produccion y caracterizacion del complejo celulotico de c. Papyrosolvens
- Autores: Vicenta Garcia Campayo
- Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 1989
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Enrique Hernández Giménez (presid.), Joaquin Moreno Mariño (secret.), Federico Uruburu Fernández (voc.), Francisco Dubón Pérez (voc.), Juan Carbonell Gisbert (voc.)
- Materias:
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- Resumen
EL OBJETO DEL TRABAJO DESARROLLADO ES EL ESTUDIO DE LA PRODUCCION DE CELULASAS DURANTE EL CRECIMIENTO DE CLOSTRIDIUM PAPYROSOLVENS SOBRE DIFERENTES SUBSTRATOS CARBONADOS (CELOBIOSA, PAPEL DE FILTRO, CELULOSA), LA CARACTERIZACION CINETICA DEL COMPLEJO ENZIMATICO Y LA PURIFICACION Y FRACCIONAMIENTO DEL MISMO. EN PRESENCIA DE SUBSTRATOS CARBONADOS SOLUBLES, CELOBIOSA, EL MICROORGANISMO SOLO PRODUCE B-GLUCOSIDASA QUE SE LOCALIZA PREFERENTEMENTE EN EL CITOPLASMA. LOS SBUSTRATOS CELULOSICOS INSOLUBLES (CELULOSA, PAPEL DE FILTRO Y CELULOSA TRATADA) INDUCEN LA SINTESIS DE B-1, 4-ENDOGLUCANASAS (CMCASAS) Y B-1,4-EXOGLUCSANASAS (AVICELASAS) ASOCIADAS AL SUBSTRATO. EL ESTUDIO CINETICO DE LOS COMPONENTES DEL COMPLEJO CELULASICO MUESTRA QUE TODOS ELLOS, CON EXCEPCION DE LA B-GLUCOSIDASA DE LAS CELULAS, PRESENTAN INHIBICION COMPETITIVA POR PRODUCTO FINAL A CONCENTRACIONES DE 1 MM, COMPORTAMIENTO SIMILAR AL DE LA MAYORIA DE ANAEROBIOS CELULOLITICOS MESOFILOS.
LA VIDA MEDIA DE LAS ENDOGLUCANASAS Y XILANASAS A 40 GRADO C ES DEL ORDEN DE 12 HORAS. PARA LAS B-GLUCOSIDASAS ESTE VALOR SE REDUCE A UNAS 3 HORAS. EL PROCESAMIENTO DEL COMPLEJO CELULOLITICO POR CROMATOGRAFIA DE INTRCABIO IONICO Y EXCLUSION MOLECULAR NO HA PERMITIDO OBTENER SEPARACIONES IMPORTANTES DE LAS DIFERENTES ACTIVIDADES ENZIMATICAS DETECTADAS.
LA MAXIMA SEPARACION SE HA CONSEGUIDO UTILIZANDO LA TECNICA DE CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO ANIONICO (DEAE-SEPHADEX A-SEPHADEX A-50). ESTE HECHO ES CONSECUENCIA DE QUE, COMO EN OTRAS BACTERIAS CELULOLITICAS (LAMED ET AL., 1983, J. BACTERIOL., 156, 2, 828-836), LAS CELULASAS DE C. PAPYROSOLVENS ESTAN CONSTITUIDAS POR MACROCOMPLEJOS SUMAMENTE ESTABLES Y DE PESO MOLECULAR MUY ELEVADO (P.M. 2 X10 AL CUBO KDA). LA APLICACION DE TECNICAS DE ELECTROFORESIS DESNATURALIZANTE (SDS-PAGE) Y ZIMOGRAFIA HA PERMITIDO, NO OBSTANTE, LOCALIZAR BANDAS ACTIVAS CMCASA (42, 50, 62, 70 Y 100 KDA) Y XILANASA (30 KDA).
