Clonacion y caracterizacion de dos genes de bacillus polymyxa que codifican b-glucosidasas

• Autores: Luis González Candelas
• Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 1990
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Rafael Santandreu Ramón (presid.), M. Eugenia Armengod González (secret.), Luis Franco Vera (voc.), Miguel Vicente Muñoz (voc.), Francisco José Murillo Araujo (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
      • Fisiología bacteriana
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• Resumen

  • SE HAN CLONADO DOS GENES DE BACILLUS PLYMYXA QUE CONDIFICAN B-GLUCOSIDASAS. UNO DE ELLOS, DESIGNADO BG1A, CODIFICA UNA PROTEINA (BGLA) QUE PRESENTA LAS SIGUIENTES PROPIEDADES CUANDO ES SINTETIZADA EN ESCHERICHIA COLI: 1) SE LOCALIZA EN EL CITOPLASMA. 2) PRESENTA MAYOR ACTIVIDAD FRENTE A CELOBIOSA QUE FRENTE AL SUBSTRATO ARTIFICIAL PNPG. 3) HIDROLIZA LA CELOBIOSA ORIGINANDO GLUCOSA Y OTRO PRODUCTO NO IDENTIFICADO. 4) SUS VALORES OPTIMOS DE PH Y T SON 6.5 Y 35 C. 5) SU PESO MOLECULAR, ESTIMADO MEDIANTE ELECTROFORESIS, ES DE 47 KDA. EL OTRO GEN, DESIGNADO BG1B, CODIFICA UNA PROTEINA (BGLB) QUE POSEE LAS SIGUIENTES PROPIEDADES CUANDO ES SINTETIZADA EN E. COLI:

    1) SE LOCALIZA EN EL PERIPLASMA. 2) PRESENTA MAYOR ACTIVIDAD FRENTE A PNPG QUE FRENTE A CELOBIOSA. 3) HIDROLIZA LA CELOBIOSA ORIGINANADO DOS MOLECULAS DE GLUCOSA. 4) SU PH OPTIMO VARIA ENTRE 6.6 Y 7.5 EN FUNCION DEL TAMPON EMPLEADO, Y SU T OPTIMA ES DE 45 C. 5) SU PESO MOLECULAR, ESTIMADO MEDIANTE ELECTROFORESIS, ES DE 47 KDA. AMBOS GENES SON DEL MISMO TAMAÑO, 1344 PB, Y PRESENTAN SEÑALES DE UNION AL RIBOSOMA Y SECUENCIAS -10 Y -35 RECONOCIBLES POR EL FACTOR DE LA RNA POLIMERADA DE B.

    SUBTILIS. EN NINGUNO DE LOS DOS GENES SE ENCUENTRAN TERMINADORES INDEPENDIENTES DEL FACTOR RHO. EL CONTENIDO G+C DE AMBOS GENESES ES SIMILAR AL DEL DNA DE B.

    POLYMYXA. EL USO DE CODONES EN BL1A Y BG1B ES SIMILAR Y CARACTERISTICO DE GENES CON BAJO NIVEL DE EXPRESION.

    AMBOS GENES, ASI COMO SUS RESPECTIVAS PROTEINAS, PRESENTAN UNA HOMOLOGIA SUPERIOR AL 40%, LO QUE PARECE INDICAR LA EXISTENCIA DE UN GEN ANCESTRAL COMUN QUE SE DUPLICO, DIVERGIENDO POSTERIORMENTE AMBOS GENES. TAMBIEN SE HA DETECTADO HOMOLOGIAS ENTRE BGLA Y BGLB CON LAS B-GLUCOSIDASAS DE CALDOCELLUM SACCHAROLYTICUM, AGROBACTERIUM SP. Y E. COLI. ESTE CONJUNTO DE ENZIMAS SE HA DEFINIDO COMO B-GLUCOSIDASAS DE TIPO I. SE HA ENCONTRADO HOMOLOGIA ENTRE ESTE CONJUNTO Y LAS FOSFO-B-GALACTOSIDASAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS, LACTOBACILLUS