Resumen de Analisis molecular de un gen que codifica una beta-(1,3)-(1,4)-glucanasa de b. Polymyxa
LA CEBADA ES UNA DE LAS MATERIAS PRIMAS EN LA ELABORACION DE LA CERVEZA. LA PARED DE LAS CELULAS DEL ENDOSPERMO AMILACEO ESTA CONSTITUIDA MAYORITARIAMENTE POR UN POLISACARIDO COMPLEJO: BETA-(1,3)-(1,4)-GLUCANO. ESTE POLIMERO CAUSA DIFERENTES PROBLEMAS A LO LARGO DE LA ELABORACION DE LA CERVEZA.
ESTE TRABAJO SE CENTRA EN EL CLONAJE Y CARACTERIZACION EN E. COLI DE UN GEN QUE CODIFICA UNA BETA-(1,3)-(1,4)-GLUCANASA DE BACILLUS POLYMYXA QUE DEGRADE ESTE POLIMERO. ESTA ESPECIE SE SELECCIONO ENTRE 24 ESPECIES DEL GENERO BACILLUS. A PARTIR DE UNA GENOTECA DE B. POLYMYXA EN E. COLI SE AISLARON 2 CLONES CON ACTIVIDAD BETA-(1,3)-(1,4)-GLUCANASA, DENOMINADOS BPL1000 Y BPL5800. ESTE ULTIMO CLON DEGRADA TAMBIEN EL XILANO, AL IGUAL QUE OTRO CLON AISLADO DE LA MISMA GENOTECA, DENOMINADO XYNL.
A PARTIR DE LOS MAPAS FISICOS DE LOS PLASMIDOS AISLADOS DE ESTOS CLONES Y EXPERIMENTOS DE HIBRIDACION SOUTHERN SE DEDUCE QUE LOS GENES RESPONSABLES DE LA ACTIVIDAD XILANASA Y GLUCANASA SE LOCALIZAN ADYACENTES EN EL GENOMA DE B. POLYMYXA. LA CARACTERIZACION DE LA ENDOGLUCANASA EN E. COLI SE ABORDO CON SU LOCALIZACION Y DETERMINACION DE SU PESO MOLECULAR.
EL ESTUDIO DEL GEN ABARCO SU LOCALIZACION EN EL FRAGMENTO CLONADO Y LA DETERMINACION DE SU ORIENTACION MEDIANTE EXPERIMENTOS DE SUBCLONAJES. TAMBIEN SE REALIZO EL CLONAJE Y EXPRESION DEL GEN EN B. SUBTILIS. ESTA CARACTERIZACION SE COMPLETO CON LA SECUENCIACION DE AMBOS GENES Y CON UN ESTUDIO DE HOMOLOGIA. FINALMENTE, SE LLEVO A CABO EL ANALISIS DE LA TRANSCRIPCION DE LOS GENES CITADOS EN B. POLYMYXA.
