Estudios de estructura-reactividad de lipasas en micelas inversas: diseño de una estrategia para su activación irreversible

• Autores: Laura Robledo Lumbreras
• Directores de la Tesis: Cristina Otero Hernández (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Alcalá ( España ) en 1996
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Soledad Penadés Ullate (presid.), Josefina Parellada Ferrer (secret.), Jesús Pérez Gil (voc.), Fidel Ortega Ortiz-Apodaca (voc.), Pilar Estrada Díaz (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Enzimología
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• Resumen

  • Las enzimas en medios organicos con bajo contenido en agua pueden actuar tanto en reacciones de hidrolisis como de sintesis, con gran selectividad. Es por lo que, en este trabajo se estudian de forma exhaustiva los aspectos que regulan la actividad de las isolipasas a y b de candida rugosa y de la lipasa de pseudomonas sp., tanto cruda como purificada, en sistemas de estas caracteristicas -micelas inversas-. La concentracion de surfactante, el tamaño de la micela (wo), el ph, la energia de activacion y la hidrofobicidad son algunos de los aspectos estudiados. La mayor interaccion con la interfase de lipasas hidrofobicas favorecen la actividad hidrolitica de esteres insolubles en agua. La modificacion quimica de la lipasa menos hidrofobica con acidos grasos aumento la hidrofobicidad de la proteina y por consiguiente su eficiencia catalitica en procesos hidroliticos. El factor de activacion es directamente proporcional al grado de modificacion. Este mismo efecto se observo cuando se modifico la lipasa de pseudomas sp. Con polietilenglicol. Un efecto contrario aparece en los sistemas micelares mixtos en los que la adicion de tween-85 reduce la eficiencia catalitica aparente de la lipasa nativa, pero no de la modificada, dada la mayor interaccion del polietilenglicol con la interfase. Por otra parte, uno de los principales problemas que ofrecen los sistemas micelares es la reduccion de la vida media de las lipasas en estos sistemas. El estudio sistematico permitio determinar que la mayor interaccion entre la lipasa y la interfase disminuye la estabilidad de estos sistemas. Es por ello, que se diseñaron estrategias que permitieron mejorar la estabilidad de las lipasas en micelas inversas. La microencapsulacion de las lipasas en micelas mediante polimerizacion con acrilamida y posterior entrecruzamiento con glutaraldehido dio resultados positivos.