Caracterización de las regiones de los extremos 3' y 5' del rna del virus de la enfermedad de newcastle necesarias para la replicación y transcripción

• Autores: Fernando Marcos Gómez
• Directores de la Tesis: Enrique Villar Ledesma (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Salamanca ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Pedro Calvo Fernández (presid.), Marcial Llanillo Ortega (secret.), María rosa Estaban Cañibano (voc.), José María Díaz Mínguez (voc.), María Amparo Estepa Pérez (voc.)
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• Resumen

  • El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es un paramixovirus que afecta al sistema respiratorio y/o nervioso de aves de corral.

    Posee una envoltura membranosa que rodea a una nucleocápsida helicoidal.

    La nucleocápsida está formada por una molécula de RNA de polaridad negativa y tres tipos de proteínas: la NP, P y L. Esta molécula de RNA esta flanqueada por los extremos 3' y 5' y entre dichos extremos se encuentran los genes que codifican a la proteínas estructurales del virus. Estos extremos 3' y 5' contienen secuencias esenciales para la replicación y la transcripción.

    Los extremos 3' y 5' del genoma del NDV de la cepa California ha sido objeto de estudio.

    Mediante técnicas de ingeniería genética se construyó un plásmidos de cDNA que son capaces de expresar en presencia de la RNA polimerasa del bacteriófago T7, un sistema genético conocido como minigenoma que consiste en una molécula de RNA que contiene la región codificante del gen CAT en polaridad negativa, flanqueada por los extremos 3' y 5' del NDV, los cuales serian replicados y transcriptos en cultivos celulares, en presencia de las proteínas víricas NP, P y L.

    De forma que los niveles de actividad CAT y la medida de la síntesis de RNA minigenómico como de RNAm del gen CAT por northern blot serian indicativos de la actividad replicativa y transcriptásica del minigenoma expresado.

    De forma que mediante construcción de minigenomas que contenían mutaciones y/o deleciones en las regiones de los extremos 5' y 3' se pudo determinar las secuencias importantes implicadas en la transcripción y replicación.

    Las secuencias promotoras de ambos procesos resultaron localizarse en los 18 primeros nucleótidos y la región comprendida entre los nucleótidos 73 al 90 de ambos extremos 3' y 5'.

    Por lo tanto el NDV al igual que otros paramixovirus presenta un promotor bipartito para la replicación y transcripción.