Purificación y caracterización genética y molecular de lipasas de candida rugosa

• Autores: M. Antonia Pernas Carralero
• Directores de la Tesis: María Luisa Rúa Rodríguez (dir. tes.), Lorenzo Miguel Pastrana Castro (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidade de Vigo ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José María Teijón Rivera (presid.), María Asunción Longo González (secret.), José María Sánchez Montero (voc.), José Berenguer Carlos (voc.), Teresa Díaz García-Mauriño (voc.)
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• Resumen

  • Las lipasas son una familia de enzimas que catalizan la hidrólisis de triglicéridos con diferentes tipos de especificidad (y capacidad para reacciones de síntesis), lo que les confiere, especialmente a las de origen microbiano, un potencial industrial en los sectores alimentarios y farmacéutico. Candida rugosa posee al menos 7 genes que codifican (con alguna excepción al código genético universal) otras tantas lipasas cuya purificación, caracterización y cristalización no ha sido posible en todas ellas. Precisamente, los costes de producción y la disponibilidad de formas puras ha limitado hasta ahora la extensión de los usos y la comprensión de las relaciones estructura-actividad. El presente trabajo que comprende la purificación y caracterización (bioquímica y cinética) de las lipasas de Candida rugosa presentes tanto en un extracto comercial como en un postincubado producido ad hoc, forma parte d eunproyecto más amplio que integra estos aspectos junto con los de producción a escala piloto y aplicación en reacciones de química fina.

    De este modo, se ha resuelto, partiendo de las fuentes indicadas y proponiendo diferentes alternativas operatorias, la purificación de las lipasas Lip1, Lip2 y Lip3 (esta última en forma de monómero y dímero) en cantidades suficientes como para permitir comparar de forma sistemática sus propiedades y, en el caso particular de Lip2, su cristalización. Así, a pesar de su similitud en cuanto a valores de peso molecular, punto isoeléctrico y grado de glicosilación, las enzimas mostraron diferencias en la especificidad de sustrato, especialmente significativas frente a la longitud de cadena de triglicéridos y en la estabilidad frente al efecto combinado del pH y la temperatura, siendo las más termoestables Lip2 y Lip3 dimérica.

    También el comportamiento cinético fue diferente. Mientras Lip3 dimérica mostró perfiles prácticamente michaelianos como consecuencias de la mayor