Resumen de Production of collagen-targeted recombinant human growth factors for regenerative medicine purposes: BMP-6 and bFGF
En la Tesis se describe la producción de dos factores de crecimiento con importancia para los procesos de reparación ósea (proteína morfogenética de hueso-6 ó BMP-6 y factor de crecimiento fibrobástico básico ó bFGF) con un dominio adicional de alta afinidad por el colágeno tipo I (CBD), derivado del factor de von Willebrand. Estas proteínas fueron producidas empleando dos sistemas de expresión heterólogos distintos (Escherichia coli y un sistema eucariótíco basado en baculovirus/células de insecto). La BMP-6 producida en Escherichia coli en forma de cuerpos de inclusión fue solubilizada y sometida a distintas condiciones de replegamiento in vitro para tratar de obtener formas homodiméricas de la molécula. Las proteínas BMP-6, BMP-6-CBD, bFGF y bFGF-CBD producidas mediante el sistema de baculovirus/células de insecto fueron purificadas mediante cromatografía de afinidad por heparina y sus propiedades de pegada a esponjas absorbibles de colágeno tipo I y actividad biológica fueron analizadas in vitro. Finalmente, se realizó un ensayo de osificación heterotópica en ratas para determinar si la combinación de bFGF y BMP-6 era capaz de aumentar los niveles de osificación frente a la BMP-6 sola, y si la adición del CBD permitía aumentar la persistencia local del bFGF en el lugar del implante y, con ello, incrementar su efecto potenciador de la osificación
