Expresión de la glutaminasa humana recombinante en sistemas bacterianos y de baculovirus

• Autores: Jose Angel Campos Sandoval
• Directores de la Tesis: Javier Márquez Gómez (dir. tes.), Ignacio Núñez de Castro (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Málaga ( España ) en 2002
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Victoriano Valpuesta Fernandez (presid.), Ana Rodríguez Quesada (secret.), Enrique Querol Murillo (voc.), José Manuel Cuezva Marcos (voc.), Emilia Mira Dámaso (voc.)
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• Resumen

  • La sobreexpresión de glutaminasa es una característica fenotípica exhibida por una amplia variedad de tumores humanos y experimentales. La obtención de proteína pura y catalíticamente activa en cantidades apreciables supone un tremendo desafío, no superado aún para ninguna glutaminasa de mamíferos, pese a que resulta fundamental para averiguar sus propiedades cinéticas y reguladoras y determinar su estructura tridimensional.

    Los resultados obtenidos en la presente Memoria permiten concluir que las proteínas recombinantes de glutaminasa humana, isoenzimas K y L, se expresan con actividad catalítica en células de insecto infectadas con baculovirus.

    La actividad específica en las células de insecto al menos 30 veces superior a la que poseen las respectivas enzimas nativas. Por consiguiente, este sistema de expresión heteróloga se presenta muy útil como fuente de ambas enzimas para los estudios de estructura/función.

    Se han generado anticuerpos policlonales isoenzima-específicos frente a las proteínas recombinantes y péptidos sintéticos. La evidencia experimental obtenida empleando estos anticuerpos, tamibén permite concluir que la coexpresión de ambas isoformas en células y tejidos de mamíferos es mucho más frecuente de lo que se pensaba hasta ahora.

    Las dos proteínas se expresan en cerebro de mamíferos como rata y mono, así como en varias líneas celulares de cáncer de mama humano. Elucidar el papel fisiológico que cada proteína desempeña debe ser una prioridad futura, acrecentada por el hecho de la nueva localización nuclear encontrada para la isoenzima L.

    La cromatografía de afinidad de la glutaminasa humana tipo L, basada en su interacción con una proteína de la familia PDZ, permite su purificación en un solo paso a partir de un extracto celular. La afinidad y especificidad de la interacción,junto con la facilidad y simplicidad en la elución, permiten plantear su potencial aplicación en l