Silenciamiento de genes de biosíntesis de giberelinas mediante rna antisentido y ribozimas y caracterización del mutante hkt1 de arabidopsis

• Autores: Jose Pérez Gómez
• Directores de la Tesis: Jose Luís García Martínez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Politècnica de València ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Ricardo Flores Pedauye (presid.), Pedro Luís Rodríguez Egea (secret.), Miguel Ángel Blázquez (voc.), Lola Peñarrubia Blasco (voc.), Jaime F. Martínez García (voc.)
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• Resumen

  • Las giberelinas son sustancias reguladoras del crecimiento en plantas, y están implicadas en el control de la mayoría de las etapas del desarrollo de las mismas. La manipulación genética de la biosíntesis de giberelinas en plantas es una herramienta muy útil para la comprensión del papel de estas fitohormonas en el desarrollo vegetal, así como para la obtención de mejoras en plantas cultivadas. En este trabajo, se ha estudiado el efecto de la manipulación genética de la ruta de biosíntesis de GAs en Arabidopsis thaliana, a nivel de los genes AtCPS, que codifica una ent-copalil difosfato sintasa, y cuatro genes distintos que codifican GA 20-oxidasas. Para ello se han empleado ribozimas de cabeza de martillo, pequeños RNAs con actividad catalítica capaces de unirse a un RNA sustrato y cortarlo. En el caso del gen AtCPS también se ha empleado RNA antisentido a modo de control. Se ha obtenido una planta transgénica que expresa un fragmento del gen AtCPS en forma antisentido con niveles reducidos de expresión del gen AtCPS, lo que causa una disminución del contenido en giberelinas activas de la planta, y un fenotipo semienano. En cambio, la expresión en plantas transgénicas de ribozimas de cabeza de martillo diseñados para cortar al gen AtCPS no provocaron una reducción en los niveles de expresión de AtCPS. En plantas transgénicas que expresan ribozimas diseñados frente a genes que codifican GA 20-oxidasas tampoco se observó una reducción de los niveles de transcritos de dichos genes, ni una alteración de los caracteres fenotípicos controlados por GAs. Así pues, la técnica de RNA antisentido ha sido más eficaz que la de ribozimas de cabeza de martillo.

    En este trabajo también se ha obtenido clones de cDNA de los genes AtGA20ox4 y 5, que codifican GA 20-oxidasas. Se ha demostrado la actividad GA 20-oxidasa de su productos de expresión in vitro, y se ha visto que estos genes se expresan mayoritariamente en flo