Resumen de Desarrollo de fluoroinmunoensayos en tiempo retardado para determinar proteina c-reactiva y haptoglobina en la especie canina. Estudios de validación analítica y clínica
En el presente trabajo se establecieron varios objetivos (metodológicos y de aplicación clínica) para intentar resolver algunas de las limitaciones existentes para el empleo de las determinaciones de proteínas de fase aguda en la especie canina.
Como primer objetivo se aislaron y purificaron la proteína C-reactiva y la haptoglobina caninas a partir de sueros de fase aguda. La CRP fue purificada mediante inmunopurificación utilizando anticuerpos policlonales anti-CRP canina y por cromatografía de afinidad usando una columna de agarosa unida a fosforiletanolamina a través de enlace epoxi. Esta última técnica proporcionó una proteína más pura que la primera. La haptoglobina fue purificada mediante fraccionamiento con amonio sulfato seguido de filtración en gel. La elevada pureza de la CRP y Hp obtenidas permitió utilizarlas como estándares en los fluoroinmunoensayos fabricados en el presente estudio para la determinación de sendas proteínas en el perro. Las CRP y Hp purificadas podrían servir como inmunógenos en la obtención de anticuerpos anti- CRP y anti-Hp caninas o como material control en otros métodos comerciales de medida de dichas proteínas.
El segundo objetivo se centró en la obtención de un inmunoensayo basado en fluorometría en tiempo retardado para la cuantificación de la proteína C-reactiva canina. Se obtuvo un ensayo no competitivo o tipo sándwich en tres pasos con anticuerpos biotinados como anticuerpos de captura y anticuerpos marcados con europio como anticuerpos de detección, usando como fase sólida tiras de microtitulación recubiertas de estreptavidina. El ensayo fue validado satisfactoriamente desde el punto de vista analítico y clínico. Así pues el método exhibió una buena precisión y exactitud, acompañada de una elevadísima sensibilidad (el límite de detección de nuestro método es el más bajo de todos los existentes en la actualidad) y de la ausencia de interfere
