Dedifferentiation of rabbit adult fibroblast nuclei by nuclear transfer and chimaerism: an animal model to obtaining human embryonic stem cells

• Autores: Rita Pilar Cervera Juanes
• Directores de la Tesis: Fernando García Ximénez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Politècnica de València ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Baselga Izquierdo (presid.), Inmaculada Molina Botella (secret.), Anna Veiga (voc.), María Teresa Paramio Nieto (voc.), María José Escribá Pérez (voc.)
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• Resumen

  • El objetivo del presente trabajo pretende desarrollar dos técnicas, la transferencia nuclear de células somáticas y el quimerismo, para desdiferenciar células somáticas derivadas de individuos de edad muy avanzada. Para ello se ha utilizado el conejo como modelo animal para la clonación terapéutica en humanos.

    Durante los sucesivos experimentos realizados en el presente trabajo, las etapas técnicas de la transferencia nuclear y las condiciones de trabajo se fueron definiendo y mejorando progresivamente. Un claro ejemplo de esta evolución técnica queda reflejado en la definición de los tratamientos de fusión y activación. Durante la realización de estos experimentos, los aspectos biológicos relativos a la transferencia nuclear de células somáticas fueron también estudiados.

    Cuando se utilizaron fibroblastos de individuos de avanzada edad, no se observaron diferencias en la tasa de blastocistos (30-ADF 21% vs 60-ADF 19% vs 90-ADF 18%). Las diferencias detectadas en la tasa de blastocistos escapados no alcanzaron niveles de significación (30-ADF 11% vs 60-ADF 18% vs 90-ADF 18%). Sin embargo, en los grupos 60- y 90-ADF, los embriones alcanzaron el estadio de blastocisto más pronto que en el grupo de 30-ADF (día 4: 40% y 50% vs 8%, p>0.05). Además, la calidad de los blastocistos fue inferior en el grupo 30-ADF (buena: 30-ADF 38% vs 60-ADF 90% vs 90-ADF 90%, p>0.05).

    Para evaluar la hipotética capacidad de desdiferenciación de embriones en estadios tempranos del desarrollo sobre fibroblastos de individuos muy envejecidos, así como el posible efecto de auxilio celular ejercido por parte de estos fibroblastos sobre los embriones reconstituidos, se realizaron una serie de experimentos de quimerismo. Puede concluirse de estos experimentos, que la inserción de fibroblastos no supone daño alguno sobre los embriones, y que el estadio embrionario de 4-8 células es el más adecuado para realizar el quimerismo, pu