Purificación y caracterización de una leucina aminopeptidasa de lactobacillus plantarum
- Autores: Pablo Casares Proaño
- Directores de la Tesis: Juan Luis Serra Ferrer (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad del País Vasco - Euskal Herriko Unibertsitatea ( España ) en 1998
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Federico Uruburu Fernández (presid.), Aida Marino Sanchez (secret.), Josefa Liboria Segovia Parra (voc.), Concepción Rodríguez Fernández (voc.), Unai Ugalde Martinez (voc.)
- Materias:
- Texto completo no disponible (Saber más ...)
- Resumen
Se identificó una bacteria aislada de salchichón como Lactobacillus plantarum mediante las galerías de identificación API 50 CHL para Lactobacillus. Esta bacteria crece en óptimas condiciones en medio de cultivo MRS, presentando una cinética de crecimiento típica de muchas bacterias lácticas.
El uso de la prensa de French, resultó ser un método adecuado para la ruptura celular y para la obtención de un extracto celular con actividad leucina aminopeptidasa (LAP). Partiendo de este extracto celular se logró purificar una LAP a homogeneidad empleando cuatro etapas en la purificación: cromatografías convencionales de intercambio iónico (DEAE celulosa) y de interacción hidrofóbica (Phenyl Sepharose), seguida de cromatografía en FPLC de intercambio iónico (Mono Q) y de tamizado molecular (Superose 12 HR).
La LAP fue purificada 520 veces y muestra una actividad específica de 195 U mg-1 de proteína siendo el rendimiento del 31%. El enzima nativo es un homodímero de 74 a 76 kDa constituído por dos subunidades de 37 kDa. El enzima puro libera preferentemente Leu situada en el extremo NH2-terminal de diversos sustratos pero no ácido aspártico ni glutámico. Esta especificidad permite su clasificación como leucil aminopeptidasa bacteriana, apareciendo en la vigente nomenclatura de enzimas registrada como EC 3.4.11.10.
