Purificación de la proteína acopladora trwb. El papel del dominio transmembrana en el mecanismo de conjugación de r388
- Autores: Itsaso Hormaeche Berciano
- Directores de la Tesis: Itziar Alcorta Calvo (dir. tes.), Fernando de la Cruz (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad del País Vasco - Euskal Herriko Unibertsitatea ( España ) en 2003
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Alicia Alonso Izquierdo (presid.), Lucía Gallego Andrés (secret.), José M. Valpuesta (voc.), María Elena Cabezón Navarro (voc.), Matxalen Llosa Blas (voc.)
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- Resumen
TrwB es la proteína acopladora del plásmido R388. Este tipo de proteínas son las encargadas de poner en contacto la maquinaria de procesamiento del DNA con la responsable de su transporte, en el fenómeno de conjugación bacteriana.
Las proteínas acopladoras son intrínsecas de membrana y por ello, poco estudiadas. En este trabajo diseñamos dos protocolos de purificación de TrwB y TrwB con una cola de seis histidinas en su extremo carboxilo terminal, obteniendo así muestras de TrwB monomérica y de TrwB hexamérica.
Con la intención de determinar el papel que desempeña el dominio transmembrana de TrwB en la conjugación del plásmido R388, realizamos estudios de estabilidad de dicha proteína frente a una versión soluble que carece de dicho dominio (TrwBAN70).
Comparamos la actividad ATPasa y la unión de nucleótidos de aTrwB con y sin dominio de membrana, así como del mutante TrwBK136T (mutadala Lys136 del motivo de unión de nucleótidos Walker A).
Por último hemos comenzado a realizar estudios de reconstitución de TrwB en sistemas de membrana modelo, liposomas, siendo un entorno más parecido a la membrana celular.
