Interferencia funcional entre c-myc y p53 en células de leucemia

• Autores: Eva M. Ceballos Garcia
• Directores de la Tesis: Javier León Serrano (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Cantabria ( España ) en 2001
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Augusto Silva González (presid.), María Dolores Delgado Villar (secret.), José Luis Fernández Luna (voc.), Ignacio Pérez Roger (voc.), Sonia Laín Claësson (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • c-myc se sobrexpresa en gran numero de tumores y algunas leucemias. Hemos utilizado la linea celular K562, derivada de una leucemia mieloide cronica (LMC) humana, como modelo para estudiar la interaccion funcional entre c-Myc y p53. Utilizando dos metodos diferentes, generamos dobles transfectantes K562 con expresion condicional para c-Myc y p53. Las celulas transfectadas expresan p53val135 mutante, que adopta una conformacion silvestre a 32ºC, mientras que la induccion de c-Myc fue aumentada con un vector de expresion inducible por Zn. Hemos visto que con la conformacion silvestre de p53 resulta en una parada del ciclo celular y apoptosis en k562, pero que c-Myc es capaz de rescatarlas de las apoptosis. La inhibicion de la apoptosis fue determinada por estudios morfologicos, union de Anexina V, actividad metabolica y fragmentacion internucleosomal del DNA. Ademas Myc no interfiere con la localizacion y degradacion de p53. Por otro lado, la expresion de Myc inhibe la transactivacion mediada por p53 de varios gees diana de p53 como Mdm2, Bax, p21waf1, PG13, 14-3-3, Perp pero no de Ciclina G. Para estudiar si c-Myc afectaba a p53 a nivel transcripcional, contrasfectamos el gen indicador luciferasa que lleva el promotor del gen diana de p53 a estudiar, con un vector de expresion c-myc. Ademas el cambio a 32ºC va acompañado de una bajada de la actividad quinasa de Ciclina E/Cdk2, medida mediante un ensayo quinasa. Los datos son consistentes con la sobreexpresion de c-Myc en presencia de p53 silvestre observada en la mayoria de las LMC en crisis blastica. Ademas, c-Myc es capaz de inhibir la transactivacion de p53 en otras lineas celulares derivadas de LMC, leucemia mieloide aguda, linfoma de Burkitt, cancer de prostata y epitelio de pulmon.