Resumen de Análisis bioquímico, genético y molecular de una carboxipeptidasa de la levadura de fisión schizosaccharomyces pombe
EN ESTE TRABAJO ABORDAMOS LA CARACTERIZACION GENETICA Y BIOQUIMICA DE UNA ACTIVIDAD CARBOXIPEPTIDASICA, DENOMINADA CARBOXIPEPTIDASA YSPS DE LA LEVADURA DE FISION SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE QUE LIBERA LEUCINA DE SUSTRATOS PEPTIDICOS TALES COMO EL SUSTRATO CBZ-GLY-LEU.HEMOS PURIFICADO EL ENZIMA EMPLEANDO DISTINTOS PASOS CROMATOGRAFICOS Y HEMOS DESCUBIERTO QUE EL ENZIMA ES UN OLIGOMERO. EL ENZIMA MUESTRA GRAN AFINIDAD POR LA LEUCINA EN EL EXTREMO CARBOXILO TERMINAL, SIEMPRE QUE EL PENULTIMO AMINOACIDO SEA PEQUEÑO Y SIN CARGA. EL VALOR DE LA KM PARA LOS SUSTRATOS CBZ-GLY-LEU, CBZ-GLY-GLY-LEU, CBZ-ALA-LEU SON DE 6,7 MM, 6 MM Y 20 MM, RESPECTIVAMENTE.
LA CARBOXIPEPTIDASA YSPS PERTENECE AL GRUPO DE LAS METALOPROTEASAS, COMO SE DEDUCE DEL COMPORTAMIENTO QUE MUESTRA CON DISTINTOS INHIBIDORES TIPICOS DE PROTEASAS Y DE IONES METALICOS.
EL ENZIMA ES UNA GLICOPROTEINA, CON TRES SITIOS POTENCIALES DE GLICOSILACION, COMO SE DEDUJO TRAS REALIZAR DISTINTAS DIGESTIONES CON ENDO H.
HEMOS OBTENIDO ANTICUERPOS QUE RECONOCEN ESPECIFICAMENTE A LA CARBOXIPEPTIDASA YSPS EN UN EXTRACTO CRUDO DE LA LEVADURA DE FISION.
MEDIANTE MUTAGENESIS CON EMS, SE AISLO UNA CEPA DEFICIENTE EN ACTIVIDAD CARBOXIPEPTIDASICA QUE PORTA CON UNA MUTACION CROMOSOMICA Y RECESIVA, Y AFECTA AL GEN ESTRUCTURAL DEL ENZIMA.
TAMBIEN COMENZAMOS LA CARACTERIZACION MOLECULAR DE LA CARBOXIPEPTIDASA YSPS Y HEMOS AISLADO PLASMIDOS RECOMBINANTES DE UNA GENOTECA QUE SON CAPACES DE COMPLEMENTAR LA MUTACION PREVIAMENTE AISLADA.
