Regulación de la expresión del genoma mitocondrial. Efectos tejido-específicos de las hormonas tiroideas

• Autores: Erika María Fernández Vizarra Bailey
• Directores de la Tesis: Patricio Fernández-Silva (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Zaragoza ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Manuel Cuezva Marcos (presid.), Manuel José López Pérez (secret.), Victor Sorribas Alejaldre (voc.), Ana María Pérez Castillo (voc.), Francesc Villarroya Gombau (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Hormonas
      • Biología molecular
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • El trabajo se ha dividido en tres líneas: 1.- Calidad de las preparaciones mitocondriales Los ensayos in organello han constituido una parte importante en la metodología empleada para el desarrollo del trabajo en la Tesis. Para llevar a cabo este tipo de ensayos es necesaria la obtención de muestras de mitocondrias aisladas que se realiza básicamente mediante tres pasos: 1) ruptura celular; 2) centrifugación diferencial y 3) lavados de la fracción cruda mitocondrial. Al evaluar el rendimiento, pureza y funcionalidad de las preparaciones mitocondriales obtenidas según el método empleado, se ha comprobado que son perfectamente funcionales y aceptablemente puras y totalmente adecuadas para los ensayos de transcripción y síntesis de proteínas in organello. Además, se ha comprobado que el último paso de lavado elimina eficientemente los principales contaminantes sin pérdida de mitocondrias.

    2.- Diferencias en la capacidad OXPHOS entre distintos órganos Se valoraron las diferencias existentes entre distintos órganos en cuanto a la actividad de fosforilación oxidativa (OXPHOS), con el fin de determinar cual es el peso de la regulación de la expresión del DNA mitocondrial (mtDNA) en cada uno de los diferentes tejidos y analizar cuales son las etapas más relevantes y los factores implicados en dicha regulación. Para establecer comparaciones se eligieron cinco tejidos: cerebro, corazón, hígado, músculo esquelético y riñón. Se tomaron muestras de ratas hembra y macho para determinar actividad de citocromo c oxidasa (COX) y de citrato sintasa (CS), además de niveles de mtDNA con respecto al DNA nuclear (nDNA). A partir de este estudio se propone la utilización de la normalización de los parámetros mitocondriales por cantidad de mtDNA y nDNA para facilitar la comparación entre tipos celulares y situaciones fisiológicas diferentes. Se ha confirmado la existencia de diferencias en la actividad respiratoria mitocondrial entre los órganos anali