Análisis proteómico con muestras biológicas e interacción con células en cultivo de la proteína de fase aguda itih4 bovina
- Autores: Idoia Iciar Alonso Fauste
- Directores de la Tesis: María Iturralde (dir. tes.), María Ángeles Álava Martínez de Contrasta (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Zaragoza ( España ) en 2009
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Javier Naval Iraberri (presid.), Fermin Lampreave Palacios (secret.), Juan J. Calvete (voc.), Julian Pardo Jimeno (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La proteína ITIH4 (cadena pesada H4 de la familia de inhibidores inter-alfa de tripsina) es una proteína de fase aguda positiva en distintas especies, entre ellas la porcina, la bovina y, en menor medida, en la humana. Al igual que la mayoría de proteínas plasmáticas, ITIH4 es una glicoproteína, y presenta una masa molecular de 120 kDa. A diferencia de otros miembros de su familia, no posee actividad inhibitoria de tripsina, dado que carece de la secuencia consenso de unión a bikunina, subunidad responsable de dicha actividad. Su función biológica es, por el momento, desconocida. Se han descrito inhibiciones producidas por la proteína en la acción de células inflamatorias y un papel relevante durante la regeneración hepática. Asimismo, se han detectado recientemente fragmentos de la proteína en suero de pacientes con cáncer de ovario y mama.
El análisis del patrón de isoformas de la proteína ITIH4 en diferentes muestras bovinas mediante electroforesis bidimensional seguida de MALDI-TOF ha demostrado la existencia de dos grupos de isoformas con masa molecular similar y diferentes puntos isoeléctricos. Dicho fenómeno parece característico de la proteína bovina, puesto que no se ha observado ni en suero humano ni en suero porcino. Los resultados obtenidos indican que estos dos grupos de isoformas se generan debido a una diferencia en el patrón de glicosilación de la proteína ITIH4.
El estudio de la interacción de la proteína ITIH4 con las células de leucemias Jurkat y derivadas de Jurkat altamente proliferativas, Jhp y Jws, y con las células de carcinoma mamario MCF-7, ha mostrado que dicha proteína se encuentra intensamente fragmentada en el interior de las células, hecho que no se observa en el caso de células no tumorales, como las células mononucleares de sangre periférica (PBMC), ni para otras proteínas de fase aguda.
En las líneas tumorales estudiadas la proteína ITIH4 no se detectó en la membrana plasmática, mientras que en las células sanguíneas una proporción de ITIH4 variable según la población celular, sí se localizó en la membrana. Los linfocitos B fueron la población de PBMC con mayor unión de ITIH4 a la superficie celular y, junto con los linfocitos NK, los que presentaron una mayor internalización de proteína.
En todos los tipos celulares estudiados la proteína ITIH4 se localizó tanto en el citoplasma como en el núcleo celular, donde apareció asociada a la heterocromatina. En el caso de las células tumorales, los resultados de este estudio han permitido concluir que los fragmentos de ITIH4 detectados contienen la región C-terminal de la proteína.
Asimismo, se ha llevado a cabo un análisis de los exosomas procedentes de leche bovina. La proteína ITIH4 no se detectó en dichas vesículas. Sin embargo, los resultados obtenidos indican que dichos exosomas contienen los mRNA de la ITIH4 y la GAPDH.
Se requieren más estudios para comprender mejor estos resultados y así avanzar en el estudio de la función de esta proteína.
