Resumen de Estudio funcional de la enzima hmg-coa sintasa mitocondrial. Nuevo método de expresión y ensayo enzimático
La HMG-CoA sintasa mitocondrial humana (mHS), es la enzima llave de la síntesis de cuerpos cetónicos. Su deficiencia (OMIM 600234) da lugar a una enfermedad rara, de la que tan solo se han descrito 8 pacientes en todo el mundo. Su dificultad diagnóstica esta relacionada con una clínica poco específica, la ausencia de biomarcadores y los problemas de expresión y medición de actividad de la enzima. Por ello, el objetivo fundamental de este trabajo ha sido la puesta a punto de un método de sobreexpresión de la proteína mHS humana, que permitiese obtenerla en elevada cantidad, de forma estable y con un alto grado de pureza. A partir de esta proteína recombinante se ha medido la actividad de la enzima mediante un ensayo puesto a punto en nuestro laboratorio. Esto ha permitido un estudio funcional de las variantes alélicas missense conocidas. Además, se ha caracterizado un nuevo paciente con dos mutaciones: una nonsense que da lugar a una proteína truncada con 85 aminoácidos menos, y otra misssense que codifica una proteína inestable. También se ha estudiado el efecto de la dimerización sobre la función de la enzima, demostrando que el impedimento de interacción entre los dos monòmeros que la componen da lugar a su inactivación. Por último, se ha caracterizado una variante fisiológica de splicing del gen HMGCS2 con deleción del exón 4, que genera una proteína afuncional e inestable. Esta variante se ha detectado en elevada proporción en tejidos consumidores de cuerpos cetónicos como músculo esquelético y corazón, sugiriéndose que actúa en ellos como una forma de regulación negativa de la expresión de la enzima.
