Estudio funcional de variantes en el gen gla: implicación en la heterogeneidad clínica de la enfermedad y en su tratamiento

• Autores: Javier Gervas Arruga
• Directores de la Tesis: Pilar Giraldo Castellano (dir. tes.), Miguel Pocoví Mieras (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Zaragoza ( España ) en 2013
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Carlos Rodríguez Rey (presid.), Rosario Osta Pinzolas (secret.), José Luis Capablo Ilesa (voc.), José Manuel García Fernández (voc.), Vicente E. Climent Payá (voc.)
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• Resumen

  • La enfermedad de Fabry (EF) es una alteración de acúmulo lisosomal producida por una deficiencia de la enzima lisosomal ¿-galactosidasa A. Este defecto conlleva a la acumulación de glucoesfingolípidos, Gb3 de forma mayoritaria, en los lisosomas de varios tejidos; principalmente en el epitelio vascular, renal, cardíaco y el sistema nervioso. De acuerdo con el tipo de mutación en el gen GLA (gen que codifica para la síntesis de la ¿-galactosidasa A) y el inicio de las manifestaciones clínicas, los casos de EF se clasifican en dos tipos de fenotipos: el tardío y el clásico. Las manifestaciones clínicas del fenotipo clásico en los varones, incluyen las acroparestesisas; angioqueratomas; hipohidrosis; opacidad corneal y lenticular; disfunción cardiaca; alteraciones renales y del sistema nervioso central. Las mujeres portadoras pueden ser asintomáticas o llegar a desarrollar el fenotipo clásico debido al fenómeno de inactivación del cromosoma X. El diagnóstico en la EF, probablemente, está subestimado debido a la naturaleza no específica de las manifestaciones clínicas asociadas a la enfermedad. El tratamiento en las primeras fases de desarrollo de la enfermedad es muy importante para la mejora de calidad de vida del paciente e impedir secuelas irreversibles.

    Hasta la fecha se han descrito más de 600 mutaciones causales de EF (ver enlaces), además el gen GLA presenta siete variantes fisiológicas de ayuste alternativo y la alteración del patrón de ayuste, se genera por una gran cantidad de esas mutaciones. Las mutaciones exónicas pueden también alterar el patrón de ayuste, pero no son reconocidas fácilmente. Han sido descritas un gran número de variantes polimórficas del gen GLA pero no se ha demostrado si la herencia de haplotipos formados por la combinación de estas variantes puede causar EF. El haplotipo complejo intrónico (HCI) dentro del gen GLA (IVSO-10C>T, IVS2-76_80del5, IVS4-16A>G, IVS6-22C>T) ha sido asociado a neuropatía de fibra fina y en un estudio de cribado el 8,9% de sujetos con síntomas de EF presenta este haplotipo. El haplotipo IVS2-76_80del5, IVS4-16A>G, IVS6-22C>T ha sido detectado en pacientes con afectación renal. Por otra parte la mutación G183V también ha sido asociada a la EF; esta mutación se encuentra en la junta del exón 3 con el 4 en la región codificante del gen GLA, causando el cambio de aminoácido 183 en la secuencia proteica de la enzima y posiblemente un patrón aberrante de ayuste.

    La identificación de los pacientes de Fabry en la población general está dificultada por la baja prevalencia de la enfermedad y la naturaleza heterogénea de sus síntomas. El diagnóstico viene determinado por niveles bajos de actividad enzimática y confirmado por el estudio mutacional. El problema es que la enfermedad carece de biomarcadores que reflejen el estado del paciente. El análisis enzimático no es adecuado para el diagnóstico y seguimiento de mujeres heterocigotas, ya que la expresión de la enzima depende del patrón de activación del cromosoma X, o para varones con variantes atípicas de la enfermedad en los que la actividad residual es muy alta. No existe una relación entre el genotipo y el fenotipo que presentan los pacientes.

    La terapia principal de la enfermedad se basa en la administración de la enzima recombinante humana por vía intravenosa. Aunque la respuesta a la terapia en muchos casos es buena, no refleja una mejora en todas las morbilidades asociadas a la EF. Existen indicios de que hay otros mecanismos implicados en el desarrollo de la enfermedad y el conocimiento molecular de esos mecanismos, puede permitir identificar nuevas dianas terapéuticas para la mejora de la calidad de vida de los pacientes con EF.

    Teniendo en cuenta estos hechos nos planteamos los siguientes objetivos: 1.-Caracterizar funcionalmente las variantes del haplotipo complejo intrónico (IVSO-10C>T, IVS2-76_80del5, IVS4-16A>G, IVS6-22C>T) y G183V encontradas en un grupo de individuos con y sin síntomas y signos de EF y profundizar en los mecanismos moleculares patológicos relacionados con las diferentes manifestaciones clínicas de la enfermedad.

    2.-Identificar los mecanismos epigenéticos relacionados con las diferentes variantes clínicas de la EF.

    3.-Buscar nuevos biomarcadores de diagnóstico y seguimiento de la enfermedad.

    4.-Realizar una prueba de concepto de aplicación de fármacos hipometilantes en líneas primarias de fibroblastos en la EF.