Aplicaciones de la biología molecular a la identificación y diferenciación de micobacterias

• Autores: Sofía Samper Blasco
• Directores de la Tesis: Carlos Martín Montañés (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Zaragoza ( España ) en 1997
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Rafael Gómez-Lus Lafita (presid.), María José Rabanaque Hernández (secret.), Arturo Ortega Calderón (voc.), José A. Caminero Luna (voc.), M. Jesus Garcia Garcia (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
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• Resumen

  • LOS METODOS MAS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACION DE LAS MICOBACTERIAS SON LOS BASADOS EN SUS CARACTERISTICAS FENOTIPICAS Y BIOQUIMICAS. ESTAS TECNICAS PRESENTAN EL INCONVENIENTE DEL TIEMPO DE ESPERA NECESARIO PARA OBTENER EL RESULTADO PARTIENDO DE UN CULTIVO CRECIDO. A ESTO SE AÑADE QUE EL FENOTIPO NO ES TOTALMENTE ESTABLE. LA IDENTIFICACION MOLECULAR BASADA EN EL GENOTIPO SUPONE MAYOR ESTABILIDAD Y PRECISION EN LA IDENTIFICACION A NIVEL DE ESPECIE Y APORTA RAPIDEZ Y SENCILLEZ AL DIAGNOSTICO. HEMOS UTILIZADO DOS TECNICAS DE IDENTIFICACION MOLECULAR BASADAS EN PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION), UTILIZANDO DIFERENTES DIANAS TALES COMO EL GEN HSP65KD Y 16SRDNA, COMO ALTERNATIVA A LA IDENTIFICACION MEDIANTE PRUEBAS BIOQUIMICAS.

    POR OTRA PARTE LAS TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR PERMITEN LA DIFERENCIACION INTRAESPECIFICA. EN ESTE TRABAJO SE HAN APLICADO TECNICAS PARA DIFERENCIAR ENTRE M. TUBERCULOSIS. LA DETERMINACION DEL RFLP (RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM) POR HIBRIDACION CON IS6110 HA DEMOSTRADO SER UTIL PARA EL ESTUDIO EPIDEMIOLOGICO DE LA TUBERCULOSIS EN NUESTRO MEDIO. SE HA REALIZADO UN ESTUDIO POBLACIONAL EN ZARAGOZA UTILIZANDO MARCADORES GENETICOS PARA ESTUDIAR LA TRANSMISION Y SE CONCLUYO QUE LOS FACTORES DE SEROPOSITIVIDAD PARA EL VIH Y LA INMIGRACION NO PARECEN ESTAR ASOCIADOS A MAYOR TRANSMISION DE TUBERCULOSIS. LA DETECCION DE UN GRAN NUMERO DE PEQUEÑOS BROTES PODRIA SER DEBIDA A LA FALTA DE UN PROGRAMA DE CONTROL. OTROS METODOS DE RFLP BASADOS EN LAS SECUENCIAS REPETIDAS PGRS Y DR Y EL METODO DE "SPOLIGOTYPING" (BASADO EN PCR) HAN DEMOSTRADO SER LOS MAS ADECUADOS PARA DIFERENCIAR CEPAS CON BAJO NUMERO DE COPIAS. LOS METODOS DE RFLP NECESITAN PARA SU REALIZACION UN CULTIVO CRECIDO POR LO QUE SE IDEO UN METODO BASADO EN PCR. EL METODO DE DIFERENCIACION PCR-IS6110 ES UN METODO SENCILLO, RAPIDO Y UTIL ANTE LA SOSPECHA DE BROTES O CONTAMINACIONES EN LABORATORIO. SE HA COMPROBADO QUE EL METODO DE "SPOLIGOTYPING" ES