Relaciones estructura-función en el sistema microsomal citocromo p-450: reconstitución y localización de centros funcionales

• Autores: Francisco Centeno Velázquez
• Directores de la Tesis: Carlos Gutiérrez Merino (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Extremadura ( España ) en 1991
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan López Barea (presid.), Germán Soler Grau (secret.), Miguel García Guerrero (voc.), Manuel J. Estevez Prieto (voc.), María Carmen Alvarez Tinaut (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Enzimología
  • Ciencias de la vida
    • Biofísica
      • Bioenergética
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• Resumen

  • LOS OBJETIVOS DE ESTE ESTUDIO HAN SIDO LA LOCALIZACION DE LOS CENTROS FUNCIONALES EN CITOCROMO P-450 Y EN LA NADPH-CITOCROMO P-450 REDUCTASA, ASI COMO LA ELABORACION DE UN MODELO PARA LA LOCALIZACION DE AMBAS PROTEINAS EN LA MEMBRANA MICROSOMAL QUE TENGA EN CUENTA LAS EXIGENCIAS FUNCIONALES DEL SISTEMA. SE HAN PURIFICADO NADPH-CITOCROMO P-450 REDUCTASA Y CITOCROMO P-450 A PARTIR DE MICROSOMAS DE HIGADOS DE RATAS INDUCIDAS CON FENOBARBITAL. LA LOCALIZACION DE CENTROS FUNCIONALES EN AMBAS PROTEINAS SE HA ABORDADO MEDIANTE TRANSFERENCIA DE ENERGIA DE FLUORESCENCIA Y RECONSTITUCION EN VESICULAS LIPIDICAS DE COMPOSICION CONOCIDA. LOS RESULTADOS OBTENIDOS MUESTRAN QUE LOS GRUPOS FAD Y FMN DE LA NADPH-CITOCROMO P-450 REDUCTASA SE ENCUENTRAN RELATIVAMENTE ALEJADOS DE LA INTERFASE LIPIDO-AGUA, Y QUE AMBOS GRUPOS SE HALLAN EMBEBIDOS EN LA ESTRUCTURA PROTEICA, SIENDO LA DISTANCIA ESTIMADA ENTRE AMBOS GRUPOS DE 20 A. SE APORTAN EVIDENCIAS EXPERIMENTALES DIRECTAS QUE MUESTRAN QUE FAD ES MENOS ACCESIBLE AL MEDIO ACUOSO QUE FMN Y QUE CONTRIBUYE CON APROXIMADAMENTE EL 84+-3% A LA FLUORESCENCIA TOTAL DE FLAVINAS EN LA NADPH-CITOCROMO P-450 REDUCTASA NATIVA, ADEMAS DE LA PRESENCIA DE UN DOMINIO DE UNION DE ESTEROIDES EN CITOCROMO P-450. LA DISTANCIA ESTIMADA ENTRE EL GRUPO HEMO DE CITOCROMO P-450 Y LAS CABEZAS POLARES DE LOS LIPIDOS EN SISTEMAS RECONSTITUIDOS ES DE 48-50 A, SIENDO LA DISTANCIA DEL GRUPO HEMO AL SITIO DE UNION DEL SUSTRATO MENOR DE 53 A.

    POR ULTIMO, SE PROPONE UN MODELO PARA LA LOCALIZACION DE LOS CENTROS FUNCIONALES DE AMBAS PROTEINAS EN LA MEMBRANA MICROSOMAL.