Fmn ciclasa: identificación y especificidad de sustrato de una enzima de hígado de rata que forma riboflavina 4', 5' -fosfato cíclico a partir de flavina adenina dinucleótido
- Autores: Francisco Jose Fraiz Alvarez
- Directores de la Tesis: José Carlos Cameselle Viña (dir. tes.), María Carmen Pinto Corraliza (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Extremadura ( España ) en 1999
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Germán Soler Grau (presid.), Joao Nuno Meireles da Silva Gonçalves Ribeiro (secret.), María Antonia Günther Nonell (voc.), Juan Carlos Palacios Albarrán (voc.), Claudio Fernández de Heredia (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Se han identificado en hígado de rata una liasa (ciclante) que actúa sobre flavina adenina dinucleótido (FAD) y forma AMP y riboflavina 4', 5' -fosfato cíclico (4',5'-cFMN).
Este producto fue identificado por cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC), análisis enzimático, descomposición en ácido y espectroscopía ultravioletavisible y de resonancia magnética nuclear. La enzima fue purificada y caracterizada parcialmente. Mostró un requerimiento estricto de Mn2+o Co2+ como catión activador y no funcionó con Mg2+. El valor de Km para FAD fue de 6 muM con Mn2+ y de 50muM con Co2+, ambos a pH 7,5.
Por lo que se refiere a la formación de nucleótidos cíclicos, la enzima es específica. No mostró actividades de FAD pirofosfatasa, adenilato-, guanilato- o citidilato-ciclasa, fosfodiesterasa formadora de nucleótidos 2',3'-cíclicos, FAD sintetasa, nide rotura de otros dinucleótidos distintos del FAD. Sin embargo, sí rompió algunos nucleósido-difosfoazúcares (NDP-azúcar). A este respecto, la actividad sobre NDP-azúcares mostró un patrón de especificidad bien definido, pues, por ejemplo, ADP-glucosa fue sustrato de la enzima pero ADP-manosa y dTDP-glucosa no lo fueron. De entre 28 compuestos estudiados, sólo 10 fueron atacados por la enzima, y de ellos, el mejor sustrato fue el FAD. Se propone para esta enzima la denominación FAD AMP/liasa (ciclante) o FMN ciclasa. Se detectó también en hígado una fosfodiesterasa de 4',5'-cFMN. Ambas enzimas perfilan una nueva vía para el recambio de nucleótidos de flavina en mamíferos.
inanciado por CICYT, Junta de Extremadura y Fondo Social Europeo).
