Purificación y caracterización de diferentes formas mutantes de la citotoxina alfa-sarcina
- Autores: Javier Lacadena García-Gallo
- Directores de la Tesis: Álvaro Martínez del Pozo (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 1997
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Jose Gregorio Gavilanes Franco (presid.), Covadonga Vázquez Estévez (secret.), Mercedes Oñaderra Sanchez (voc.), Jose Luis Garcia Lopez (voc.), Jose Luis Barbero Esteban (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La alfa-sarcina es una proteína producida por el hongo aspergillus giganteus mdh 18894, perteneciente a un grupo de ribotoxinas fungicas que se caracterizan por su carácter citotoxico, debido a su actividad ribonucleolitica. El cdna de esta proteína se ha clonado en diferentes sistemas de expresión permitiendo la purificación de alfa-sarcina recombinante, estructural y enzimáticamente indistinguible de la fúngica. Este sistema de expresión ha permitido la producción de grandes cantidades de formas marcadas uniforme y selectivamente (tyr y phe) con n15 y c13, aspecto este imprescindible para la resolución de la estructura tridimensional de la proteína. Se han purificado y caracterizado diferentes formas mutantes de la alfa-sarcina, en residuos pertenecientes al centro activo de la proteína. Esto ha podido confirmar la participación de las his50 y 137 en el mantenimiento de la actividad ribonucleolitica de esta proteína inactivante de ribosomas. Por otro lado, mutaciones en la cys76 y 132 implican una mayor dificultad en su purificación y su caracterización sugiere el mantenimiento de su capacidad para interaccionar con bicapas lipídicas.
