Resumen de Producción de células natural killer activadas con interleuquina-15 para uso clínico en pacientes pediátricos con cáncer
INTRODUCCIÓN: En las últimas décadas se han mejorado las tasas de supervivencia de los tumores infantiles. Sin embargo, la recaída y la refractariedad aún condicionan un mal pronóstico. Por ello es necesario desarrollar nuevas estrategias terapéuticas para mejorar los índices de curación. La inmunoterapia constituye un procedimiento con un desarrollo prometedor. Dentro de ella se incluye la inmunoterapia basada en células Natural Killer (NK).
Diferentes estudios publicados han demostrado el potencial terapéutico de las células NK, en ausencia de efectos adversos severos. La actividad citotóxica inmediata de las células NK, la posibilidad de expandirlas y manipularlas bajo condiciones de Normas de Correcta Fabricación, y la posibilidad de combinarlas con otros tratamientos, hacen de estas células un arma terapéutica potente a desarrollar.
Por ello, se pretende analizar en esta tesis doctoral la plausibilidad del uso de los principales métodos de selección y expansión que actualmente se utilizan para la terapia celular con células NK en pacientes pediátricos con cáncer.
OBJETIVOS: Los objetivos de esta tesis son: - Describir los procesos de producción de células NK para uso clínico a partir de sangre periférica de donantes sanos: Células NK activadas ex vivo con IL-15 (NK-IL15) y células NK activadas y expandidas ex vivo (NKAE).
- Comparar las características morfológicas y funcionales de los productos finales.
- Describir la utilización de estos productos en tres ensayos clínicos con pacientes pediátricos con tumores sólidos y leucemias refractarias o en recaída.
- Evaluar si existe correlación entre el número de células NKAE y de linfocitos T (LT) infundidos y la respuesta tumoral.
MATERIAL Y MÉTODOS: Los productos NK-IL15 Y NKAE fueron obtenidos a partir de leucoaféresis de donantes sanos haploidénticos.
Las NK-IL15 se obtienen utilizando el sistema CliniMACS®. En primer lugar se realiza purgado de LT y posteriormente selección de la población NK. Por último, se incuba ex vivo con IL-15 para estimular las células NK.
Las NKAE se obtienen mediante cocultivo con la línea celular K562-mbIL15- 41BBL irradiada, en un medio suplementado con IL-2 durante 14-21 días.
En los productos finales, se analiza la cantidad de células NK y LT, así como la expresión de receptores en la superficie de las células NK activadas y su capacidad citotóxica.
Estos productos se utilizaron en tres ensayos clínicos con pacientes pediátricos. Las NK-IL15 se infundieron en pacientes con tumores sólidos refractarios tras un trasplante de progenitores hematopoyéticos (TPH) haploidéntico. Las NKAE se utilizaron en dos ensayos clínicos con pacientes con leucemia aguda refractaria o en recaída, en combinación con distintos regímenes de quimioterapia.
RESULTADOS: El número de células NK obtenidas por ambos procedimientos fue similar. Se observó menor cantidad de LT en NK-IL15 que en NKAE. La expresión de receptores activadores en la superficie de las células NK activadas (CD69, CD25, NKG2D, NKp44, NKp46, NKp30, DNAM-1) fue superior que en células NK basales en ambos productos, siendo superior en el caso de las NKAE. NK-IL15 y NKAE presentan mayor actividad citotóxica que las células NK basales. No se encontraron alteraciones genéticas ni potencial oncogénico en ninguno de los productos.
En el ensayo con NK-IL15 participaron 6 pacientes, realizándose un total de 8 infusiones. La mediana de células NK infundidas fue de 11,3× 106/kg (3–27 × 106/kg). La cantidad de LT fue <1 × 103/kg (0–0,75× 103/kg). Las infusiones se realizaron 30 días tras un TPH haploidéntico. No se registraron efectos adversos relacionados con las infusiones. En cuatro pacientes se observó respuesta tumoral (1 paciente presentó muy buena remisión parcial, 2 remisión parcial y uno estabilización de la enfermedad). Un paciente progresó y en otro no se pudo evaluar la respuesta. Todos los pacientes fallecieron tras una mediana de seguimiento de 310 días, 4 por progresión y 4 por toxicidad relacionada con el TPH.
En los ensayos con NKAE se infundieron un total de 52 productos con una mediana de 6,76 x 106 células NK/kg (0,7-34,16 x 106) y 0,49 x 106 LT/kg (0-11 x 106). Participaron en estos ensayos un total de 18 pacientes, consiguiendo remisión completa al final de los ensayos en el 72%. Todas las infusiones fueron bien toleradas, sin objetivarse efectos adversos severos ni casos de enfermedad injerto contra receptor relacionados con las infusiones. En Julio de 2018, tres pacientes permanecían vivos, sin evidencia de enfermedad.
CONCLUSIONES: Los métodos de producción de células NK para uso clínico descritos en este trabajo son factibles y permiten obtener una elevada cantidad de células NK activadas. Las características morfológicas y funcionales de ambos productos finales son diferentes. Ambos productos presentan una mayor expresión de receptores activadores que las células NK basales, lo que se relaciona con mayor citotoxicidad antitumoral in vitro. Su infusión a pacientes pediátricos es segura, sin registrarse reacciones adversas severas y presentan un efecto terapéutico positivo. Se ha observado una correlación positiva entre el número de células NKAE y de LT infundidos y la respuesta tumoral, existiendo una tendencia a mejor respuesta en los pacientes que han recibido mayor cantidad de células NKAE y mayor cantidad de LT.
