NAD(P)+ -glucosa deshidrogenasa de Haloferax mediterranei: propiedades moleculares, mecanismo cinético y clonaje
- Autores: Carmen Lucía Pire Galiana
- Directores de la Tesis: María-José Bonete (dir. tes.), Mónica L. Camacho Carrasco (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat d'Alacant / Universidad de Alicante ( España ) en 1998
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Antonio Ferragut Rodríguez (presid.), Juan Ferrer Casanova (secret.), Francisco Javier Llorca Díaz (voc.), Arturo Manjon Rubio (voc.), José Berenguer Carlos (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: RUA
- Resumen
La glucosa deshidrogenasa de Haloferax mediterranei se ha purificado a homogeneidad. La estructura de la proteína es un dímero de 89 KDa. Presenta el óptimo de actividad enzimática en NaCl 1.75 M o en KCl 1.3 M. La enzima es relativamente estable a concentraciones bajas de sal, presentando un tiempo de vida media de 163 h. a 0.6 M de NaCl y 17 h. a 45 mM de NaCl. Las sales estabilizan la conformación activa de la proteína aumentando su termoestabilidad, siendo el incremento de entalpía y la energía de activación independientes de la concentración salina. La enzima presenta especificidad dual para el coenzima, aunque posee una afinidad muy superior por el NADP. Puede emplear como sustrato alternativo xilosa y presenta inhibición por exceso de sustrato a concentraciones de glucosa superiores a 0.2 M. Presenta un mecanismo secuencial ordenado de estado estacionario.
Se produce activación de la enzima por cationes divalentes. La enzima contiene dos átomos de zinc por subunidad.
Empleando como sonda el extremo N ter. se ha clonado y secuenciado un fragmento de 1.5 kb, que tras realizar comparaciones no parece formar parte del gen de la glucosa deshidrogenasa. Se postula que se trate de parte del gen de una molibdoproteína.
